DB34T 3474-2019 饲料中黄芩苷的测定 高效液相色谱法.docxVIP

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DB34

安徽省地方标准DB34/T3474—2019

饲料中黄芩苷的测定高效液相色谱法

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2019-12-25发布2020-01-25实施

安徽省市场监督管理局发布

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DB34/T3474—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽安丰堂动物药业有限公司、安徽省兽药饲料监察所、东至县畜牧兽医局、安徽省动物疫病预防与控制中心、阜阳市动物卫生监督所。

本标准起草人：刘发全、何宗来、周宏华、谢军池、明文庆、陈文帮、王群、丁常宏。

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DB34/T3474—2019

饲料中黄芩苷的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了饲料中黄芩苷含量测定的高效液相色谱法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中黄芩苷含量测定。本方法检测限为1.0mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

试样中的黄芩苷用甲醇水溶液超声提取，经离心、过滤后的试样溶液注入高效液相色谱系统中进行分离，用紫外检测器检测，外标法计算黄芩苷的含量。

4试剂和材料

4.1除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682中一级用水规定。

4.2甲醇：色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。

4.4甲醇水溶液：50％（V+V)。4.5磷酸。

4.6流动相A：磷酸溶液（0.025mol/L）。4.7流动相B：乙腈。

4.8黄芩苷：CAS号21967-41-9，纯度≥98.0％。4.9黄芩苷标准溶液的制备

4.9.1黄芩苷标准溶液贮备液：精确称取20mg黄芩苷标准品(精确至0.01mg)于200mL容量瓶中，用流动相（4.6）溶解，冷却，此溶液浓度为100μg/mL。置于4℃冰箱中保存，有效期60天。

4.9.2黄芩苷标准工作溶液：分别吸取贮备液（4.9.1）1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容，标准工作溶液系列浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。

5仪器和设备

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DB34/T3474—2019

5.1高效液相色谱仪(配紫外检测器)。5.2分析天平：感量0.1mg、0.01mg。

5.3离心机：≥3000r/min。5.4超声波仪。

5.5分析筛：孔径0.42mm。5.6粉碎机。

5.7微孔滤膜：孔径0.45μm尼龙滤膜。

6试样的制备

按GB/T14699.1的规定采样，选取有代表性饲料样品500g以上，四分法缩减至100g;按GB/T20195的规定制备样品，磨碎，全部通过分析筛(5.5)，混匀，装入磨口瓶中备用。

7分析步骤

7.1试样的提取

7.1.1称取试样适量（配合饲料5.0g、浓缩饲料3.0g、预混合饲料1.0g），精确至0.001g，置于100mL磨口三角烧瓶中，准确加入甲醇溶液（4.4）50mL，置于超声波仪（5.4）超声提取30min。7.1.2取试样提取液（7.1.1）20mL转移至离心管，3000r/min，离心10min，取离心上清液2mL，用0.45μm尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定，同时进行两份平行试验。

7.2参考色谱条件

7.2.1色谱柱：C18型柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当性能C18柱；

7.2.2检测波长：277nm；

7.2.3流动相：A：磷酸溶液（0.025mol/L）B：乙腈，梯度淋洗，见表1；

7.2.4流速：1.0mL/min；

7.2.5柱温：室温；

7.2.6进样体积：20μL。