DB34T 3489-2019 猪瘟病毒抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法.docxVIP

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DB34

安徽省地方标准DB34/T3489—2019

猪瘟病毒抗体快速检测方法镧系荧光免

疫层析法

TheRapidDetectionMethodsforAntibodiestoClassicalSwineFeverVirusLanthanideFluorescenceImmunochromatographicAssay

2019-12-25发布2020-01-25实施

安徽省市场监督管理局发布

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DB34/T3489—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽农业大学提出并起草。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽冠华农牧有限公司、安徽禾丰浩翔农业发展有限公司、安徽省动物疫病预防与控制中心、阜阳市动物卫生监督所、怀宁县动物疫病预防与控制中心、巢湖市畜牧兽医局、六安市动物疫病预防与控制中心、成都微瑞生物科技有限公司。

本标准主要起草人：李郁、何长生、占松鹤、谢玉洁、程竹兵、李春芬、程圣芳、高亚飞、段倩倩、孙裴、袁献宇、高亚成、蒋广志、张和森。

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DB34/T3489—2019

猪瘟病毒抗体快速检测方法镧系荧光免疫层析法

1范围

本标准规定了猪瘟病毒抗体快速检测方法镧系荧光免疫层析法的原理、仪器和试剂、样品采集与处理、操作方法、结果计算、生物安全和防污染措施。

本标准适用于猪瘟病毒抗体的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3原理

镧系荧光免疫层析法（lanthanidefluorescenceimmunochromatographicassay，LFIA）快速检测猪瘟病毒抗体，系采用镧系元素铕（Eu3+）荧光纳米微球作荧光示踪物，分别标记猪瘟病毒重组E2蛋白抗原和鸡IgY，并埋置在标记垫内。硝酸纤维素膜上检测线（T）包被猪瘟病毒重组E2蛋白抗原、参考线（C）包被山羊抗鸡IgY抗体。当血清样品抗体与镧系元素铕（Eu3+）荧光纳米微球标记的猪瘟病毒重组E2蛋白抗原接触反应后形成免疫复合物，继续与硝酸纤维素膜上检测线（T线）包被的猪瘟病毒重组E2蛋白抗原反应形成复合物；其余物质向前层析，在C线处包被的山羊抗鸡IgY抗体与镧系元素铕（Eu3+）荧光纳米微球标记的鸡IgY结合形成免疫结合物。最后用镧系荧光分析仪读取检测卡上的荧光信号，经计算即可得出猪瘟病毒抗体效价。

4仪器与试剂

4.1仪器

4.1.1镧系荧光分析仪：激发波长为(400±20)nm，检测波长为(615±10)nm。

4.1.2单道可调微量移液器：0.5μL～10μL，20μL～200μL，100μL～1000μL。

4.1.3分析天平：精度0.001g。

4.1.4离心机：转速5000～15000r/min。

4.1.5冰箱：2℃~8℃,-20℃。4.2试剂

4.2.1实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格。

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4.2.2样品稀释液

4.2.2.1成分：硼酸2.16g，硼砂1.43g，叠氮化钠0.25g，硫酸葡聚糖1.00g，蒸馏水1000mL。

4.2.2.2制法：将上述成分溶解混匀后分装，保存于4℃备用。

4.2.2.3所用试剂均为分析纯。

4.2.3猪瘟病毒抗体镧系荧光免疫层析法检测试剂卡：见附录A。

5样品采集与处理

5.1样品的采集

按照NY/T541的规定，采集待检猪血液样品3mL～5mL。

5.2样品的处理

血液样品用离心机3000r/min、离心3min，血清量不少于500μL。

5.3样品的贮存

血清样品在2℃~8℃冷藏可保存24h，如需长期保存应置-20℃以下。

6操作方法

6.1准备

使用前，将待检血清样品和猪瘟病毒抗体镧系荧光免疫层析法检测试剂卡平