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抗体制备-自己整理--第1页
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制备单克隆抗体是复杂而费时的工作，整个技术流程如图：
单克隆抗体制备（免疫2-3月，总周期4-6月）
准备抗原
动物免疫选择免疫动物
Elisa测抗血清
分离脾细胞骨髓瘤细胞
细胞融合（融合剂:PEJ）
HAT培养基筛选杂交瘤细胞
筛选阳性细胞
（三天内做完流式）
阳性克隆并扩大培养细胞冻存
扩大培养收集上清动物接种收集腹水
单克隆抗体纯化保存
（一）抗原提纯与动物免疫
对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细
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胞抗原，可取1×10个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂
并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条
下，研磨后直接用以动物免疫。选择与所用骨髓瘤细胞同源的
BALB/c健康小鼠，鼠龄在8～12周，雌雄不限。为避免小鼠反应而不佳
或免疫过程中死亡，可同时免疫3～4只小鼠。免疫过程和方法与多克
隆抗血清制备基本相同，因动物、抗原形式、免疫途径不同而异，以获得
高效价抗体为最终目的。免疫间隔一般2～3周。一般被免疫动物的血清
抗体效价越高，融合后细胞产生高效价特异抗体的可能性越大，而且单克
隆抗体的质量（如抗体的浓度和亲和力）也与免疫过程中小鼠血清抗体的
效价和亲和力密切相关。末次免疫后3～4天，分离脾细胞融合。
（二）骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备
精品
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选择瘤细胞株的最重要的一点是与待融合的B细胞同源。如待融合的是脾
细胞，各种骨髓瘤细胞株均可应用，但应用最多的是Sp2/0细胞株。该细
胞株生长及融合效率均佳，此外，该细胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重
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链或轻链。细胞的最高生长刻度为9×10/ml，倍增时间通常为10～15h。
融合细胞应选择处于对数生长期、细胞形态和活性佳的细胞（活性应大于
95％）。骨髓瘤细胞株在融合前应先用含8-氮鸟嘌呤的培养基作适应培
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养，在细胞融合的前一天用新鲜培养基调细胞浓度为210/ml，次日一般
即为对数生长期
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