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新冠病毒核酸检测SOP

新冠病毒核酸检测SOP

本文旨在规范本中心感染的肺炎的检测方法。

适用范围：

本检测细则适用于体外定性检测感染的肺炎疑似病例、疑

似聚集性病例患者、其他需要进行感染诊断或鉴别诊断者的口

咽拭子、鼻咽拭子和痰液样本检测。

职责：

1.检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测；

2.复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否

准确进行复核；

3.科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。

检测依据：

本检测细则依据《感染的肺炎实验室检测技术指南》。

操作程序：

1.实验前准备

1.1检测人员进入污染区前，必须穿好一次性防护服、一

次性帽子、N95口罩、双层手套、一次性靴套、护目镜、防护

面屏不得将与实验无关物品带入实验室。

1.2调节室温至20-25°C,湿度20-80%。

1.3检测试剂在室温平衡半小时，并检查试剂是否在有效

期内。

1.4检查仪器是否正常，做好检测前准备工作。

1.5开启实验室污染区生物安全柜。

2.实验方法

2.1试剂准备（试剂准备区）

从试剂盒中取出核酸扩增反应液、酶混合液、ORFlab/N

反应液，室温融化，充分振荡混匀后瞬间离心。

计算试剂使用份数N（N=样本数+1管阳性对照+1管阴性

对照），根据下表配置反应体系，力口入一适当体积离心管中，

充分振荡混匀后瞬间离心，按20U1.分装至PCR反应管中，

并转移至样本处理区。

加入体积（ML）/人份ORFlab/N反应液总体积20

2.2样本处理（样本处理区）

2.2.1核酸提取：待测样本、阳性对照及阴性对照按照核

酸提取试剂盒说明书进行操作。

2.2.2加样：在上述准备好的PCR反应管中分别加入待测

样本核酸、阳性、阴性对照各5u1.终体积为25u1./管，盖紧管

盖，瞬时离心。

2.3PCR扩增检测（核酸扩增区）

2.3.1将PCR反应管置荧光定量PCR仪扩增检测。

2.3.2插上仪器电源线，打开仪器背部的电源开关，仪器

开机初始化。等待至指示灯停止闪动，变成稳定绿色，进入下

一步操作。

2.3.3打开电脑桌面qsoft4.1软件，进入qsoft4.1用户界面，

表明仪器与电脑连接成功,进入下一步操作。

2.3.4新建程序：单击菜单栏中标页目一、创建新的程序。

或者调入已保存的PCR程序模板文件，运行程序。

1.创建新程序时，点击“创建项目”，设置PCR基本参数、

文件名、反应体系和操作者等。

2.设置实验程序时，按照试剂盒说明书中的循环参数设定

进行温度循环设置。注意，在步骤3中，应该设置荧光检测时

的温度为55°C。在勾选基因通道时，需要填写检测信号（管

1）。点击保存，保存我们所创建的新程序。

3.在界面左下角点击“Home”，进入实验向导。更改文件

名、操作者，勾选模块。基因通道默认为我们所设置的，如需

要可勾选全通道扫描。

4.进行孔板编辑，设置样品孔定义，根据样品数设置孔板。

点击右下侧的样本项目，进行样本类型的更改，设置阴阳对照。

5.反应条件全部设好后，打开仪器蓝色滑盖，放入样品，

盖上盖子，点击“实验运行”，再点击“开始”，即可开始运行程

序。运行程序前，会要求设置好结果文件保存路径。运行结束

后，结果文件会自动保存在指定的文件夹中。

6.进行结果分析参数设定。根据分析后扩增曲线图调节起

止值。建议起始设在3~15，终止设在5-20.同时调整阴性对照

的扩增曲线平直或低于阈值线。点击分析，在报告界面查看结

果。

7.根据临床样本检测结果，利用R0C曲线法确定ORFlab、

N参考值均为Ct值等于38.

8.进行检验结果的解释。以下要求需在同一实验中同时满

足，否则本次实验无效序。HEX/VIC通道，ROX通道内参—

CW30.

9.实验结束后，打开仪器蓝色滑盖，