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无菌、微生物限度检查做法精炼

微生物限度检测：（1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计

数法）

一般有三种方法：平皿法、薄膜法、MPN法。

样品计数方法的验证：

1培养基适用性的检查

TSA:培养的是需氧菌总数，包括真菌。需要用的金黄色葡萄球菌，

（革兰氏阳性菌）

铜绿假单胞菌，（革兰氏阴性菌）

枯草芽孢杆菌，（细菌中芽孢的代表）

白色念珠菌，（酵母菌的代表）

黑曲霉。（霉菌的代表）

SDA霉菌和酵母的总数白色念珠菌，(酵母的代表)

黑曲霉。（霉菌的代表）

怎么做呢？

在TSA验证时，每一株菌有4个平皿，试验组2个，对照组2个。

对照组用的是中检院的TSA对照组培养基。

每个皿中接不大于100CFU/ml的菌。

然后：1摇匀2凝固3倒置（细菌是单细胞的生物正置会有水滴

下来，菌落会蔓延

）细菌培养30-35度培养3d需要做5种菌（金黄色葡萄球菌，

铜绿假单胞菌，

枯草芽孢杆菌，白色念珠菌，黑曲霉）

真菌培养20-25度培养5d（培养的温度是由培养基的种类决定

的，培养的时间是由微生物的种类决定的。需要做2种菌。

结果：

结论

被检培养基上菌落的平均数与对照培养基上菌落的平均数的比值

在0.5-2范围内合格。

2计数方法的适用性(有抑菌性，导致微生物数减少)

微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计

数。

Ppc原理

A组供试液（试验组）（供试液加菌液100CFU）2种方法：

供试液+（每ml不超过100CFU的菌）平皿法

+（每张膜中加入100CFU的菌）薄膜法

B组供试液组对照组供试液（以稀释液代替菌液组操作）

C组菌液组菌液每ml不超过100CFU的菌

取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作

加入试验菌进行微生

物的回收。

(A-B)/C的比值在0.5-2之间。

日常检测

检验量：一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）

一般为10g或10ml(随机抽取不少于2个必威体育精装版包装，从两个包装

中取)

回收率；（修正系数）（用于医疗器械上的微生物的测量，或者

是固体需要做的，因

为洗脱不完全）

第一种：薄膜过滤法（微生物较多的情况，产品直接洗脱法）

无菌

一、培养基适用性检查(无菌性和灵敏度)

目的:确认培养基的有效性。

无菌性的目的：避免假阳性

灵敏度的目的：估计培养基的营养成分，是否能够促进生长。

要做的两种培养基：

FTM(硫乙醇酸盐流体培养基)】主要用于厌氧菌，可用于需氧菌的

培养。

特性：灭菌后25℃的pH为7.1±0.2培养温度30-35℃

培养后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2,

接种前氧化层的高度不超过培养基深度的1/3

（要是超过了，100度水浴不超过20min,只能加热一次）

TSB(胰酪大豆胨液体培养基)主要用于真菌和需氧菌的培养。

特性：灭菌后25℃pH为7.3±0.2培养温度20-25℃

培养基的存放条件：制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌

封闭容器中，在2-25℃、避光环境中保存，并在验证的保存期内使用。

1、无菌性操作

每批5支/瓶培养基FTM（数量没有定，一般9ml）30-3514d

TSB20-2514d

2、培养基灵敏度（看有无营养性）

怎么做