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大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞

（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。在众多研究

中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用

提供了基础。本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，

并结合实验数据进行阐述。

BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化

为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。因其来源广

泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重

要研究对象。近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴

定方法也得到了不断优化和改进。

BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适

量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。细胞的鉴定主要包

括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。其中，表面

标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的

证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。

本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。具体步骤如下：

采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，

加入肝素抗凝。

细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。

细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素

和1%谷氨酰胺的培养基培养。

细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行

细胞鉴定。通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，

对BMSCs进行鉴定。

通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，

且细胞间连接紧密（图1）。经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和

CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。在多向分化潜能的证实中，

我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、

脂肪滴和肌纤维（图3）。这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。

讨论与结论大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法在再生医学、免疫调节

等领域具有广泛的应用价值。本实验通过常规的体外培养方法成功地

分离和扩增了BMSCs，并通过形态学观察、表面标志物检测和多向分

化潜能的证实，对所培养的细胞进行了鉴定。结果表明，所培养的细

胞为大鼠BMSCs，具有多向分化潜能和低免疫原性等特点。在未来的

研究中，我们可以进一步探究BMSCs在不同条件下的分化机制和应用

前景，为其在科研和临床领域的应用提供更多依据。

间充质干细胞（MSCs）是一类具有自我复制能力的多能细胞，具有广

阔的应用前景。在众多研究中，大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSCs）由

于其来源广泛、易于分离培养等特点，成为的焦点。本文将重点探讨

如何建立rBMSCs的稳定分离培养体系，并对所得细胞进行鉴定，为

进一步的应用研究提供理论依据。

材料实验对象：健康成年大鼠试剂：DMEM/F12培养基、胎牛血清、

青霉素/链霉素溶液、25%胰蛋白酶、胶原酶

方法（1）rBMSCs的分离与培养①麻醉大鼠，无菌条件下取出股骨

和胫骨，剪去骨骺端，用DMEM/F12培养基冲洗骨髓腔；②离心后弃

上清，用胶原酶消化骨髓中的间充质细胞，然后用DMEM/F12培养基

中和；③接种细胞至培养瓶中，加入含10%胎牛血清、1%青霉素/链

霉素溶液的DMEM/F12培养基，置于37℃、5%CO2孵箱中培养。

（2）细胞鉴定①细胞爬片，用4%多聚甲醛固定细胞，1%胶原酶消

化细胞并重悬；②滴加细胞悬液至载玻片上，风干后用Giemsa染色；

③显微镜下观察细胞形态和生长情况，计算细胞增殖倍数。

rBMSCs的分离与培养经过分离培养，我们成功获得rBMSCs。细胞呈

梭形、星形或不规则形，散在分布或呈集落样生长（图1）。

（请在此处插入rBMSCs的显微镜下图片）细胞鉴定经过Giemsa染

色，可在显微镜下观察到胞核居中，核仁明显的rBMSCs（图2）。通

过计算细胞增殖倍数，我们发现rBMSCs具有较好的增殖能力。

（请在此处插入rBMSCs的Giemsa染色图片）

本研究成功建立了rBMSCs的稳定分离培养体系，并对所得细胞进行

了鉴定。结果表明，所分离培养的rBMSCs具有良好的细胞形态和增

殖能力。这一成果为进一步研究rBMSCs在组织工程、细胞治疗等相

关领域的应用提供了可靠的实验基础。未来研究方向可包括探讨

rBMSCs在不同条件下的分化能力