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两种曲酶糖化性质的比较研究
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在国内传统的制酒行业中,由于黑曲霉含有丰富的酶系如液化酶、糖化酶、纤维素酶和
蛋白酶等,自70年代大多都由米曲霉改为黑曲霉作糖化用菌种。但在日本迄今仍在采用米
曲霉做糖化菌,说明其中必有原因。鉴于此,本实验以黑曲霉和米曲霉为研究对象,研究比
较它们的液化酶和糖化酶(葡萄糖淀粉酶)生产性质。
黑曲霉是一种常见的真菌,属于半知菌类曲霉属。黑曲霉对营养要求较低,只要培养基
中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、硫等元素即能生长良好。黑曲霉可以产生许多种酶,现已
成为工业应用常见的菌种之一。根据bigelis1989年的统计,25种主要商品酶制剂中就有15
种来源于黑曲霉仁。它们分别是α-淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、葡萄糖酶、糖化酶、
葡萄糖氧化酶、半纤维素酶、橙皮昔酶、脂肪酶、果胶酶、蛋白酶、单宁酶。美国准许使用
的食品工业用酶生产菌种只有黑曲霉、酵母、枯草杆菌等约20种,其中以黑曲霉所产酶类
最多。我国酶制剂工业生产用菌种中,黑曲霉占了17种中3种,即黑曲霉变异株和,它们分
[1]
别用于糖化酶、果胶酶和酸性蛋白酶的生产。黑曲霉酶类在工业上具有重要的作用,例如,
柠檬酸等有机酸的发酵生产、食品及饮料加工以及用于轻化工业、纺织工业、饲料加工和废
物的处理等等。总之,黑曲霉生产的酶制剂具有用量大、应用范围广、安全性好的特点,已
愈来愈受到人们的重视。
米曲霉的菌丝由多细胞组成,是一类产复合酶的菌株,除产蛋白酶外,还可产淀粉酶、
糖化酶、纤维素酶、植酸酶等。在淀粉酶的作用下,将原料中的直链、支链淀粉降解为糊精
及各种低分子糖类,如麦芽糖、葡萄糖等;在蛋白酶的作用下,将不易消化的大分子蛋白质
降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸,而且可以使辅料中粗纤维、植酸等难吸收的物质降解,
提高营养价值、保健功效和消化率,广泛应用于食品、饲料、生产曲酸、酿酒等发酵工业。
1材料与方法
1.1实验材料菌种:黑曲霉UV-48;米曲霉-4
1.2实验培养基
种子培养基(土豆汁培养基;察式培养基);发酵培养基(麸皮培养基;液体深层发酵液)
1.3实验试剂
1.33%可溶性淀粉;碘液;0.01MNacl-HAC缓冲液;6NHCL;DNS试剂;葡萄糖标准溶液;
无菌水
-1-
1.4实验用具
水浴锅;三角瓶;试管;721型分光光度计;高压蒸汽灭菌锅;电子天平;恒温培养箱;摇
床;电炉;酒精灯;吸管;量筒
1.5实验方法
1.5.1菌种培养
斜面菌种培养:将米曲霉和黑曲霉分别接种于土豆汁培养基和察式培养基上,于
30~32℃下培养4~7天,待产生孢子后置于5℃中备用。
军种扩大培养:从斜面培养基中挑取一环孢子接种于麸皮培养基上,于30~32℃下培养,待
长满孢子后备用。
1.5.2液化酶和糖化酶的发酵生产
孢子悬浮液的制备:挑取经扩培的菌种孢子,接入内含10ml无菌水的试管中,制成孢
子悬浮液,并在此基础上,继续稀释成108个/ml孢子悬液。稀释时可利用血球计数板推断
选择适宜稀释度的孢子悬液。
液化酶和糖化酶的发酵:取5%孢子悬浮液接种于液体深层发酵液中,置于30~32℃,
200r/min旋转式摇床上控温发酵,并定期测定酶活力,和PH。
1.5.3酶活测定
粗酶液制备:定期取20ml发酵液经纱布过滤,1000g冷冻离心5min,取上清作为粗酶液。
液化酶活性测定;取1.5ml1.33%可溶性淀粉于60C水浴5Min,加0.5ml酶液(或双蒸
水作为空白对照),60℃反应10min,取O.1ml反应液加入10ml碘液,摇匀后680nm处测
OD。每个样品作两个重复。
糖化酶(葡萄糖淀粉酶)活性测定;0.1ml1.33%可溶性淀粉加0.1ml酶液(或双蒸水作
为空白对照)60℃水浴反应20min,立即加入1mlDNS试剂,沸水浴5MIN后冷却,加入
4.8ml水,在520nm处测定OD值。
1.5.4发酵液中还原糖含量的测定
葡萄糖标准曲线的制作(取9支25
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