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小麦组织培养实验步骤1500字

一、实验目的

1、掌握无菌操作的小麦组织培养方法；

2、通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；

3、通过诱导小麦根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立

方法；

4、通过诱导小麦茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；

5、了解小麦细胞通过分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整

再生植株的过程，加深对小麦细胞的全能性的理解。

二、实验原理

（一）小麦组织培养

小麦组织培养是把小麦的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操

作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的

过程。小麦的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又

能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称

为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又

能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再

分化作用”。

（二）小麦细胞的全能性

小麦细胞的全能性即是每个小麦的本细胞或性细胞都具有该小

麦的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母

体一样的植株。

（三）组织的分化与器官建成

外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部

形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同

的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。

（四）培养基的组成

培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需

要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。

营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、小麦激素（生长

调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。

三、实验器材

高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、

玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒

精灯、喷雾器等。

四、实验材料

小麦种子

五、实验药品

药品、70%酒精、0.1%升汞、MS培养基、蒸馏水、NaOH、84消毒

液、蔗糖、琼脂等。

六、实验步骤

（一）培养基的配制

以配制1L的MS培养基为例进行如下操作：

（1）取1L的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾；

（2）分别取（一）中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，

边加边搅拌；

（3）称取30g蔗糖加入，边加边搅拌；

（4）称取8g琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解；

（5）定容至1L，加入激素母液，用NaOH调PH6.0左右；

（6）将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮

纸用绳子扎紧；

（7）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右；

（8）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却

凝固。

（二）具体的操作步骤：

1、小麦材料表面——消毒剂灭菌

从外界或室内选取的小麦材料，都不同程度地带有各种微生物。

这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，小麦材料

必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一

过程叫做接种。

2、接种步骤：

第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗

→→自来水冲洗；

第二步：对材料的表面浸润灭菌：70%酒精浸10-30秒→→无菌

水；

第三步：灭菌剂处理→→0.1-1%升汞5-8min（或其他灭菌剂）；

第四步：无菌水进行冲洗。

注意事项：灭菌剂一般要临时配制，现配现用、升汞可以短期储

存。

3、无菌操作可按以下步骤进行：

（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开

其内紫外线灯进行杀菌；

（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外

线灯；

（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖

鞋等；

（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后

搽拭工作台面；

（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过

火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤