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新冠病毒核酸检测假阳性原因分析及对策

【摘要】目的：分析应用RT-PCR法检测新冠病毒核酸出现假阳性结果的原因，并提

出解决对策。方法：选择2020年6月15日至2021年6月30日40000例疑似新冠肺炎

或新冠肺炎密切接触者的咽拭子样本进行研究，均应用RT-PCR法进行新冠病毒核酸检

测，应用成都迈克生物试剂盒首检，对于首检阳性或疑阳性的样本用长沙圣湘生物试剂盒

复检，总结假阳性样本数量及其原因。结果：40000例样本中初检阳性17例，复检阳性0

例，阴性17例，即假阳性17例。假阳性样本中3例因结果判断失误所致，7例非特异性

扩增因素所致，7例核酸污染因素所致的。结论：核酸污染、非特异性扩增、结果判断失

误是新冠病毒核酸检测假阳性发生的主要原因，故需进一步完善PCR实验室质量控制，提

高检验工作人员的规范操作，准确判断结果，以降低核酸检测假阳性率，为疫情防控提供

更为可靠的诊断结果。

【关键词】新冠病毒核酸检测；假阳性；原因

新冠肺炎是由感染新冠病毒而引起的急性传染性疾病，目前临床对本病治疗尚缺乏有

效根治方法，其治疗策略主要是及早发现疑似病例，集中治疗确诊病例，提高病例早诊早

治率，改善患者的临床结局。在诊断方面，新冠肺炎的确诊需具有病原学证据——新型冠

状病毒（2019-nCov）核酸检测阳性，或病毒基因测序与抑制的2019-nCov高度同源。

[1]

而应用实时荧光定量PCR法检测核酸应具有较高灵敏度和较强特异性，且其可批量化、检

测费用较低，成为当前临床确诊新冠肺炎的主要手段。但是在实际工作中，我们发现部分

初次检测核酸阳性的病例，复核为阴性，导致应用新冠病毒核酸检测阳性作为确诊标准备

受质疑。为此，本研究根据自身工作经验以及咨询专家，从核酸提取过程、试剂盒、结果

判断等多方面对核酸检测的相关影响因素进行探讨分析，总结新冠病毒核酸检测假阳性的

原因，进而为提高核酸检测准确性提供依据。

1资料和方法

1.1一般资料

选择2020年6月15日至2021年6月30日40000例疑似新冠肺炎或新冠肺炎密切

接触者的咽拭子样本进行研究。

1.2方法

所有样本均应用RT-PCR法进行新冠病毒核酸检测，具体方法：

1.2.1样本采集与运输：均经培训和考核合格的医务人员对受检者进行鼻咽拭子采

集，样本置于专用样本保存管中，按照A类传染病运输包装分类运送至核酸检测实验室进

行检测。

1.2.2检测试剂和仪器：PCR扩增仪（型号：LightCycler480IIROCHE）；核酸提取

仪（型号：美德瑞）；核酸提取或纯化试剂盒（迈克，圣湘）；扩增试剂均为我国药品监

督管理局审批的2种国产新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，分别产自成都迈克和

长沙圣湘生物；阳性质控品：2019-nCOV-RNA液体室内质控品（成都迈克和长沙圣湘）。

1.2.3检测方法：（1）核酸RNA提取：根据核酸提取或纯化试剂盒说明书进行操

作，结合美德瑞核酸提取仪操作规程操作。（2）实时荧光RT-PCR检测：首次核酸检测应

用成都迈克新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒说明书，对ORF-1ab基因、N、E基

因进行PCR扩增操作.

1、阴性质控品：HEX或VIC通道CT值=38，ROX通道37或无CT值，其余通

道38或无CT值。

2、阳性质控品：扩增曲线呈S型，HEX或VIC通道CT值=38，其余CT值=32.

检验结果的解释

1、靶基因检测CT值判读：

CT值判读阴性阳性

FAM通道ORFlab基因38或无CT值=38

ROX通道E基因38或无CT值=37

CY5通道N基因38或无CT值