幽门螺杆菌检测.pptVIP

**幽门螺杆菌的检测包括经胃镜检查用活检标本进行的检测和不经胃镜检查的检测方法两大类。活检标本可用快速尿素酶试验、病理切片、培养、粘膜涂片染色和分子生物学方法检测。快速尿素酶试验方法费用低、快速，是内镜检查时的首选方法；病理切片可用多种方法染色，培养可进行药敏试验和细菌学研究。不经内镜的方法包括尿素呼气试验、粪便抗原试验和血清抗体试验。13C和14C呼气试验各有优缺点，经过验证的粪便抗原试验可与呼气试验媲美，血清抗体试验阳性不能鉴别既往感染和现症感染，多用于流行病学调查。*幽门螺杆菌检测讲课内容第一节幽门螺杆菌特点 第二节幽门螺杆菌感染的检测方法第三节幽门螺杆菌检测方法的临床应用123第一节幽门螺杆菌特点幽门螺杆菌（Helicobacterpylori简称HP）,呈弧形或S形,有1—2个微小弯曲,属微需氧菌,在pH值为6—8时繁殖最为活跃,该菌具有丰富的尿素酶,可分解食物中的尿素产生氨,该菌生长于胃粘液深层,胃粘膜表面,多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔内为多。H.Pylori感染和十二指肠溃疡H.Pylori感染 D/G细胞功能改变 遗传易感性 ↑壁细胞总体增加B型慢性胃窦炎 ↑胃泌素 胃酸分泌量H.Pylori的迁移 十二指肠粘膜胃上皮化生 十二指肠球炎 十二指肠球溃疡 H.Pylori感染和胃癌的关系 浅表性胃炎正常胃粘膜 基因损伤 H.Pylori感染 弥漫性胃癌 萎缩性胃炎环境因素 胃粘膜肠上皮化生高CagA+-HP滴度宿主因素的H.pylori菌株感染 肠型早期胃癌 进展期胃癌3.HP的毒力作用取决于①定植能力②菌株的基因型③细菌的圆球体样型态④对抗菌药物的敏感性第二节幽门螺杆菌感染的检测侵入性检测方法非侵入性检测方法快速尿素酶试验病理切片染色培养黏膜涂片革兰氏染色基因方法:PCR等13C-或14C-尿素呼气试验Hp粪便抗原试验Hp血清抗体试验试验原理HP能产生丰富尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。操作过程活检同时取2块组织进行检测（胃窦和胃体各1块），标本放置于试剂后观察颜色变化。注意事项检测结果受试剂pH值、取材部位、组织大小、细菌量、观察时间、环境温度等因素影响（一）快速尿素酶试验RUT一、创伤性检查???胃镜检查胃黏膜取材,直接涂片革兰氏染色，也可包埋切片，常规HE染色或银染，直接镜检观察Hp。直接镜检（二）组织学检查1.免疫组化染色特异性高。2.HE染色可同时作病理诊断；3.荧光原位杂交（FISH）具有较高敏感性1.在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。2.接种于Hp牛脑浸液培养基，分区划线。3.置5-12％CO2培养箱35-37℃，3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血环。培养过程诊断Hp最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”。一般用于药敏试验和科研。（三）细菌培养幽门螺杆菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，设计不同的引物，从而建立不同的PCR系统，扩增产物可经凝胶电泳分析.原理与方法（四）聚合酶链反应试验(PCR检测技术)1.与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。2.现在可收集胃液PCR检测幽门螺杆菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应注:HP的基因分型（HP菌属亚群）及致病性?分布比例VacA基因CacA基因致病性Ⅰ型56%++胃炎、十二指肠溃疡、胃癌Ⅱ型16%--胃炎中间表达型28%+/-+/-?VacA基因表达空泡毒素87KDCagA基因表达细胞毒素相关蛋白128KDCagA基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时,是VacA产生效果的标志原理和过程HP能产生丰富尿素酶，能分解胃中的尿素，当整粒摄入含同位素碳-13的尿素胶囊后，碳-13尿素在尿素酶作用下，分解为氨和碳-13—二氧化碳，碳-13—二氧化碳被小肠上段吸收后，进入血循环，并随呼气排出，分析呼气中的碳-13就可诊断该细菌的存在特点和注意事项1.易于操作；可反映全胃Hp感染状况。2.检测前一个周内应停用抗生素、铋