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免疫学实验报告--第1页

免疫实验—抗血清制备及抗体效价检测

摘要：用具有抗原性的物质牛血清白蛋白（BSA)注入到健康动物例如鼠、兔的

机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，

经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中

分离析出血清，从而获得抗血清。抗血清，是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价

指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效

果。此次实验主要是进行小鼠的牛血清白蛋白（BSA)抗血清的制备过程，并通

过酶免疫吸附试验（ELISA）对其进行抗体效价检测。

关键字：牛血清白蛋白（BSA)抗血清抗体效价免疫

实验过程：

本次实验一共分为三个分实验：

实验一：免疫

实验二：抽血、放血，分离抗血清

实验三：ELISA测定抗体效价

实验一：免疫

一、抗血清制备的原理

用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细

胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要

求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。

二、目的

制备高效价的抗血清

三、实验仪器、材料和试剂

实验仪器：1mL注射器，酒精棉球，剪刀

材料：家兔，小鼠

试剂：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸，牛血清白蛋白（BSA)

三、方法和步骤

1、动物编号

左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，

右侧从前至后依次为7、8、9。红色表示十位数,用黄色表示个位数。免疫前用金

属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。

2、动物抓取及注射按

如下图所示抓取目标动物

家兔为300～600μg/次（400），每次不超过2mL；小鼠为10～100μg/次（10-20，

20~40μg/ml），每次不超过0.5mL。

小鼠腹腔注射

以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，

使针头向前推?0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，

为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。

兔子可以分别尝试皮下（脚掌）、皮内、耳静脉、肌肉注射

实验二：抽血、放血，分离抗血清

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一、采血

小鼠采血

（一）、尾部采血：需血量少时可用此方法。将小鼠放在在有开孔的离心管内，

显露尾部，将尾端剪去约5mm，从尾根部向尾端部按摩，血即从断端流出。

（二）、小鼠睚眦采血：将毛细管折断，使其断口锋利。采血时，左手拇指和食

指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定，并用中指配合，轻轻压迫颈部两侧，阻碍静

脉回流，使眼球充分外突，提示眼眶后静脉丛充血。用毛细管的断口，右手拇指、

食指和中指握住毛细管，将其尖端插入内眼角与眼球之间，轻轻向眼底方向刺入

约2~3mm，手指旋转捻动毛细管以刺破静脉丛，鼠血顺毛细管流入1.5mL无

菌离心管中，收集鼠血。采血结束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。用

本法短期内可重复采血。小鼠一次可采血0.2—0.3ml，大鼠一次可采

0.5—0.1ml。

家兔的采血

（一）、耳静脉抽血：将家兔置于兔固定箱内，对家兔进行耳静脉抽血，此法用

于小量抽血，验血测抗体效价，以便决定加强免疫或放血，与耳静脉注射方式相

反。