细胞免疫学检测PPT课件.pptx

细胞免疫学检测

（cellularimmunoassay）

一、淋巴细胞表面标志物检测

(Assayofmembranmoleculesforlymphocytes）1

一、免疫细胞分离技术(Technicofseparationforimmunocyte)二、免疫细胞表面标志检测技术（Assayofmembranmoleculesfor～）三、免疫细胞功能检测技术（AssayforImmunocyteTuntion）四、细胞因子与黏附分子检测技术（AssayforCytokineandAdhesionmolecule）2

免疫系统(Immunesystem)免疫器官(ImmuneOrgans)免疫细胞(Immunocyte)★免疫球蛋白(Immunoglobulin)主要组织相容性复合体(MajorHistocompatibilityComplex;MHC)细胞因子(Cytekine)白细胞分化抗原和粘附分子(LeukocyteDifferentiationAntigenandAdhesionmolecule)3

免疫细胞(immunecells)指:所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞、单核吞噬细胞、树突状细胞及其他细胞4

免疫细胞分离技术

(Separationofimmunocytes)5

人外周血(peripheralblood)白细胞分离一、原理(principle)：红细胞/白细胞比例不同（600～1000）：1，密度不同，沉降速度不同。二、方法(method)：1、自然沉降法（直立静置RT30～60min，紧贴红细胞层上的白膜层）2、聚合物加速沉降法（加某些高分子物使RBC凝集成串加速沉降，如明胶）6

人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMC）的分离加入对倍稀释的血液样本水平式离心20min时结果7

聚蔗糖-泛影葡胺(ficoll-hypaque)(1.077±0.001g/L)分离人外周血淋巴细胞以密度为1.077±0.001/g/L8

Percoll混悬液(处理过的硅胶颗粒)原液密度(density)为1.135g/L+等量PBS,高速离心(centrifugation)由下而上的逐减的连续密度梯度(densitygradient)淋巴细胞纯度98%,单核细胞纯度78%流程长,步骤繁,成本高9

人外周血淋巴细胞(亚群)的分纯(purificcation)人外周血单个核细胞（PBMC）主含淋巴细胞,但混有单核细胞、粒细胞、红细胞和血小板等。淋巴细胞的分纯：（一）红细胞的去除（0.83%氯化铵、蒸馏水）（二）血小板的去除（离心、洗涤）（三）单核、粒细胞的去除（黏附去除，羰基铁粉吞噬）（四）淋巴细胞亚群的分离★10

淋巴细胞亚群的分离

分离依据：1、淋巴细胞不同亚群其细胞表面标志（specificmembranemolecule/surfacemarker）2、淋巴细胞不同亚群其细胞分化抗原（antigenofclusterdifferentiation；CD）分离方法：1、11

PrecipitationofErosetteErythrocyteRosetteformingcell;ERFCThesuefaceofTlymphocytecontainsthereceptor(CD2)ofsheeperythrocyte,whichiscalledEreceptorforshort.Tlympho-cytescanformErosettewithsheeperythro-cytesbyitsEreceptor.Lymphocytes+sRBC,centrifugation-----Tlympho-cytes(底)/Blympho-cytes（界面）12

2、黏着性（理化）：B淋巴细胞易黏附聚酰胺纤维（尼龙纤维）表面，而T淋巴细胞则不易附着～（例）尼龙棉柱分离—直接流出的是T淋巴细胞。3、免疫学：用特异性抗体并使其固相化，捕获具特定膜抗原的细胞～（例）1、亲和板结合分离(affinity～)2、免疫磁珠分离（immunomagneticbeads）3、流式细胞术分离(F