《微生物检验实验》教学课件合集（共8讲）（非AI生成）.pptx

实验一、细菌的形态学检查;;;;;;;;;;;;;;;;17;;;20;21;;;;

制片初染媒染脱色复染

革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”（Gram’sPositive）表示。

革兰氏阴性菌，用符号“Gˉ”或“GN”（Gram’sNegative）表示。;;;;;;;;33;;实验二、培养基的制备技术和细菌的接种及分离培养技术;;一、培养基制备技术;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;二、细菌的接种和分离培养技术;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;实验三、细菌的鉴定技术—生物化学鉴定（一）;;生化反应设计的原理;;【目的要求】;【器材和试剂】;【步骤和方法】;;;糖发酵试验;;;;;;;96;1）培养基：克氏双糖铁琼脂（KIA）

主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。其共同的生化反应特征为：a.都能以发酵的方式分解葡萄糖。b.氧化酶全部阴性。c.都能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。KIA培养基可以观察到细菌仅发酵分解葡萄糖；同时发酵分解乳糖和葡萄糖；以及是否分解含硫氨基酸的能力。

;;;;;;;;;;4、甲基红试验;;甲基红试验;5、V-P（Voges-Proskauer）试验;;;葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径;二、蛋白质和氨基酸的代谢试验;;;;靛基质试验;119;2.硫化氢试验;;3.尿素分解试验;;4.苯丙氨酸脱氨酶试验;;;5、氨基酸脱羧酶试验;128;;;氨基酸脱羧酶试验结果判断;三、碳源和氮源利用试验;;;;;;138;;;;四、各种酶类试验;;;;;;;其他试验：氢氧化钾拉丝试验;;如何加试剂;;实验四：细菌的鉴定技术—生物化学鉴定（二）;;一、目的和要求;二、器材与试剂;三、试验的原理、方法及结果判定;一）触酶试验（过氧化氢酶试验）;;;;;二）DNA酶试验;;;;三）血浆凝固酶试验;凝聚因子（结合凝固酶）

纤维蛋白原纤维蛋白;凝固酶致活剂

凝固酶原样物质凝固酶样物质

（游离凝固酶）

纤维蛋白原纤维蛋白;;;;凝固酶试验的结果;;;;;;

四）杆菌肽敏感试验;;;;五）CAMP试验;;;186;187;;189;六）奥普托欣敏感试验;;192;;七）胆汁溶菌试验;;196;;八）胆汁-七叶苷试验;;200;九）6.5%NaCl生长试验;;四、具体操作及结果记录;实验五、抗菌药物敏感试验（一）—纸片扩散法;一、目的要求;二、器材及抗菌纸???;水解酪蛋白琼脂（Mueller-Hinton琼脂）;三、操作步骤;;210;2.操作方法：

1）制备M-H琼脂板：将高压灭菌的MH琼脂冷却至56℃无菌倾注于直径为90mm的平板中，使琼脂的厚度4mm。

2）调制菌悬液：以无菌操作，用无菌棉签挑取培养18～24h的BA待测菌1～2个菌落置于1支3ml无菌生理盐水试管中，混匀菌悬液，在比浊仪上矫正浊度为0.5麦氏单位标准的浊度（或浊度与0.5麦氏标准比浊管一致）。

;取待测菌置于无菌生理盐水中，校正其浊度相当于0.5McFarland单位（此浊度相当于1.5×108cfu/ml含菌量即1.5亿个细菌）;;用无菌棉签浸入菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀涂抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。;215;4）贴纸片：

a.均匀密涂完细菌盖上平板的盖子后，室温放置3～10min，待平板上菌悬液的水分被琼脂完全吸收，但放置不宜时间太久，否则在贴纸片前细菌已开始生长可使抑菌圈缩小。

b.根据不同菌株挑选相应的抗菌药物纸片，挑选纸片的原则参照美国临床实验室标准化协会（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute，CLSI）的原则进行。

c.用无菌的小镊子将抗菌药物纸片帖于MH琼脂表面某一点，两纸片中心距离=24mm，纸片中心距平板内缘15mm，90mm平板最好贴6张。

d.贴上纸片后用镊子压一下，使其贴平贴紧，一旦纸片贴上后，不能随意移动，因为纸片中的药物此时就开始自动扩散到琼脂中，贴好所有的纸片后置室温15min后再倒扣平板，作上标记。

;用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂

的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中

心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。;CLSI抗菌药物的分组;219;220;5）孵育：将平板放入35℃培养箱，最好