DB34T 2996-2017 猪链球菌检验操作规程　.docxVIP

ICS11.220B41

DB34

安徽省地方标准DB34/T2996—2017

猪链球菌检验操作规程

ProtocolofexaminationforStreptococcussuis

2017-12-30发布2018-01-30实施

安徽省质量技术监督局发布

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DB34/T2996—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、合肥市动物疫病预防控制中心、东至县畜牧兽医局。

本标准主要起草人：李郁、孙裴、高亚飞、黄晓慧、何宗来、吴华健、魏建忠、王希春、郑新勇、钱昌银。

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DB34/T2996—2017

猪链球菌检验操作规程

1范围

本标准规定了猪链球菌检验的设备和材料、检验程序、操作步骤、结果报告、废弃物无害化处理与人员安全防护。

本标准适用于猪链球菌的检验。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB19489实验室生物安全通用要求

SN/T2025动物检疫实验室生物安全操作规范

SN/T2984检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则

3主要设备和材料

3.1显微镜：物镜10倍～100倍。3.2电子天平：感量0.1g。

3.3培养箱：36℃±1℃。

3.4冰箱：2℃~10℃。

3.5全自动细菌鉴定系统。

3.6pH计、pH比色管或精密pH试纸。3.7饱和氯化钠溶液：见附录A中A.1。

3.830％甘油缓冲盐水溶液：见附录A中A.2。

3.9革兰氏染色液：按照GB4789.28的规定执行。3.10姬姆萨染色液：按照GB4789.28的规定执行。3.11荚膜染色液：按照GB4789.28的规定执行。

3.12血液琼脂培养基：按照GB4789.28的规定执行。

3.13选择性普通绵羊血琼脂培养基：见附录A中A.3。

3.14选择性THB肉汤：见附录A中A.4。

3.15磷酸盐缓冲液（PBS）：按照GB4789.28的规定执行。

3.16过氧化氢试剂：按照GB4789.28的规定执行。

3.17糖发酵培养基：按照GB4789.28的规定执行。

3.18醇发酵培养基：按照GB4789.28的规定执行。

3.19七叶苷培养基：按照GB4789.28的规定执行。

3.20马尿酸钠培养基：按照GB4789.28的规定执行。

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DB34/T2996—2017

4检验程序

猪链球菌检验程序见图1。

检样

检样

显微镜检查

直接涂片

THB增首液

板

革兰氏染色姬姆萨染色

选取可疑菌

落涂片镜检、

纯培养

PCR鉴定猪链球菌

PCR血清型鉴定

结果报告

分离培养动物试验

临症表现病理变化染色镜检分离培养

生化反应

镜检

图1猪链球菌检验程序

5操作步骤

5.1采样、运输和保存

5.1.1对病猪，最急性和急性病例可无菌采集死亡猪的心、肝、肺、肾、脾、淋巴结等组织，慢性病例如关节炎型一般采取关节液及周围组织；对活猪，可采取扁桃体拭子、鼻腔拭子。

5.1.2脏器组织样品采集后需延迟送检的，可保存于饱和氯化钠溶液或30%甘油缓冲盐水溶液中，保存时间不超过72h。

5.1.3样品均需采取低温(4～8℃)保存和运输

5.2显微镜检查

5.2.1采集的样品制成触片，革兰氏染色，镜检。

5.2.2猪链球菌形态学特征：革兰氏阳性球菌，菌体直径约1m,链状排列，链长短不一，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关，固体培养物以双球菌为多，少量呈3个～5个排列的短链，液体培养物以链状为主，无芽孢，能形成荚膜。

5.3分离培养

5.3.1送检菌株的分离

划线接种于血液琼脂平板，36℃±1℃培养24h±2h,如菌落生长缓慢，可延长至48h±2h,

使之形成单个菌落，以供鉴定用。

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