T∕SAIA 005-2021 绵羊痘和山羊痘荧光PCR检测方法.pdf

ICS65.020.20

B38

体标

团准

T/SAIA00岳一2021

绵羊症和山羊症荧光PCR检测方法

Rea]”timePCRmethodfordetectionofsheeppoxandgoatpox

2021-12-20实施

2021-12-20左壶

山东省农业产业化促进会发布

前

本文件按照GBIT1.1-2020《标准化工作导则第i部分：标准化文件的结构和起直在规则））给出

的规则起草。

本文件由山东省农业产业化标准．委员会提出并归口。

本文件起草单位：山东省滨州畜牧兽医研究院、山东绿都生物科技有限公司、滨州市农业技术

推广中心、日I!~市东港区动物疫病预防控制中心。

本文件主要起草人：王金良、沈志强、唐娜、孟卫芹、高背华、魏凤、刘通、许祭友、1P:林、

于新友、陈金龙、姚春阳、陈士运、李振伟。

绵羊症和山羊症荧光PCR检测方法

1.范围

本文件规定了绵羊瘦和山羊瘦荧光PCR检测的操作方法。

本文件适用于绵羊痕和1山羊痕核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本

文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单〉适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和l试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

a术语和定义

下列缩赂i否适用于本文件。

Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的｜澜值所经历的循环数（CycleThreshold)

PBS：磷酸盐缓冲溶液（PhosphateBufferSolution)

荧光PCR：荧光聚合酶链式反应（Real-timePolymeraseChainReaction)

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid)

4仪.设备

4.1二级生物安全柜。

4.2荧光PCR检测仪。

4.3高速冷说：离心机：可控温至4吧，离心速度可达13000×g以上。

4.4普通冰箱：冷藏2。C～8。C、冷冻－20。C。

4.5超低温冰箱：可控温至－70。C以下。

4.6变速组织研磨苦苦。

4.7单通道微量移液器：量程分别为0.5µL~10µL、20µL～200µL、100µL~l000µL。

4.8电子天平：精度为0βlg。

4.9涡旋振荡器。

4.10高压蒸汽灭菌苦苦。

量试剂

5.1除非另有说明外，本标准所周检测试剂均为分析纯，实验室用水应符合GBtr6682三级水的标

准。

5.2无水乙醇：室温放置。

5.375%乙醇：配制见附录A.I，室温；放置。

5.4PBS：配制见附录A.2.

5.5引物和TaqMan探针：引物名称和序列见附录B。

5.6阳性对照：市笛tLI羊症活疫苗栋。

5.7阴险对照：无山羊瘦病毒感染的组织。

6样品的来’但、运输及处理

6.1果将注意事项

采样及样品处理过程中应戴一次性手套，样品闷不得交叉污染。

6.2样晶果，但

6.2.1病料样晶采集

取发病活体羊的皮肤丘莎或病死音。检竿的