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多肽合成的21个经验知识

1、我该如何处理和保存多肽？

冻干粉形式的多肽，经密封包装可在常温条件下稳定运输，溶解

状态的多肽不宜长期保存。

多肽保存指南：需要长期保存的多肽，应以冻干粉形式存放在含

有干燥剂的密封容器内，置于-20°C保存，-80°C效果更好，可以最大

限度地避免多肽降解。这种储存方式可以使多肽可保存数年，避免了

被细菌降解和氧化，也可以避免二级结构的形成。

打开包装：在打开包装和称重前，请先将多肽在干燥器中平衡至

室温。因多肽往往具有吸湿性，未经平衡到室温的多肽在打开盖子后

易凝结，从而降低了多肽产品的稳定性。

称重：迅速称取您所需的多肽，并将剩余多肽继续储存在-20°C

或更低温度。与其他多肽相比，含有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天

冬酰胺、谷氨酰胺和谷氨酸N-末端的多肽保存期更短。

2、如何溶解多肽？

多肽的溶解性很大程度上取决于多肽的极性。酸性的蛋白溶解于

碱性溶液，而碱性蛋白可溶解于酸性溶液，含有大量不带电荷的极性

氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量

有机溶剂中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，

然后加水（蒸馏水）稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用

DMSO溶解，因为DMSO可能造成侧链氧化。

多肽溶解测试：在多肽溶解之前先取小部分进行多肽溶解测试，

您需要测试几种不同的溶剂，直到找到最适当的一种。超声处理有助

于打碎颗粒并增加溶解度。（注意:超声处理会引起溶液发热和多肽降

解。）

1.将每个酸性氨基酸赋值为－1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸

（E）、以及羧基末端-COOH。每个碱性氨基酸赋值为＋1，包括精氨

酸（R）、赖氨酸（K）、组氨酸（H）以及氨基末端-NH2。然后计算

整个多肽的电荷数。

2.如果整段肽所带电荷是阳性的，说明该肽是碱性的。可先尝试

用蒸馏水来溶解；如果不溶于水，接着尝试用少量10%-25%醋酸溶解，

如果仍然失败的话，添加一些TFA（10-50微升）来增溶，然后用水

稀释至理想浓度。

3.如果整段肽所带电荷是阴性的，说明该肽是酸性的。酸性的多

肽可以尝试用PBS（PH7.4）来溶解，如果不溶的话，添加少量的碱

性溶剂，如0.1M的碳酸氢铵，然后加水稀释至理想浓度。含有游离

半胱氨酸的多肽应溶于脱气的酸性缓冲液中，因为当PH值大于7时，

巯基会被迅速氧化成二硫化物。

4.如果整段肽电荷是零，说明肽是中性的。中性肽通常溶于有机

溶剂。首先，尝试添加少量乙腈、甲醇或异丙醇。对于高度疏水的多

肽，可使用少量的二甲基亚砜溶解，然后用水稀释至理想浓度。对于

含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。对于有聚集倾

向的肽，可添加6M盐酸胍或8M尿素，然后进行必要的稀释。

为了防止或尽量减少多肽降解，请将多肽以冻干粉形式保存在-

20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小样存放，以避

免反复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为

溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。

碱性氨基酸:K,R,H,N-terminus

酸性氨基酸:D,E,C-terminus

极性中性氨基酸:F,I,L,M,V,W,Y

非极性疏水氨基酸:G,A,S,T,C,N,Q,P,乙酰基，酰胺基

举例说明：

RKDEFILGASRHD:(+5)+(-4)=+1认为是碱性多肽，见步骤2

EKDEFILGASEHR:(+4)+(-5)=-1认为是酸性多肽，见步骤3

AKDEFILGASEHR:(+4)+(-4)=0认为是中性多肽，见步骤4

3、一个肽段是否可溶能预测吗？

我们无法通过研究多肽的结构来预测其在水中的溶解度。然而，

赖氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于预测溶解度，尤其是短肽。

与此相反，含有天门冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的，

但易溶