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细菌内毒素检查方法综述

【关键词】细菌内毒素检查法；,,,机理；,,,预实验；,,,特殊值

细菌内毒素检查是静脉、鞘内给药药物以及放射性药物等质量检查的一个重要方面。以

前，细菌内毒素检查用家兔热原法进行，自从1980年《美国药典》第20版收载了细菌内

毒素实验以来，《英国药典》《欧洲药典》《日本药局方》《中国药典》等相继收载了该方

法。1995年《美国药典》第23版已收载了471种药品进行细菌内毒素检查，而《中国药典》

1995年版也收载了12种药品进行细菌内毒素检查［1］，2000版更收载有47种药品利用

此方法进行热原检查。细菌内毒素检查法已逐渐代替家兔热原检查法，显示出其在检查热原

方面的重要性。本文对细菌内毒素检查法作一综述。

1方法、机理及影响因素

1.1应用的方法目前，美国药品食品管理局（FDA）承认3种鲎试剂检测细菌内毒素含量的方法，即

凝胶（gelclot）法、生色（chromogenic）法和动态浊度（keniticturbidimetry）法［2］。近年来较新的方

法有水箭电泳免疫法（测残余蛋白）、酶联免疫吸附法（测残余酶）。后者所需鲎试剂仅相当于凝胶法的

1/100，且灵敏度更高，抗干扰能力更好。《中国药典》1995年版只采用凝胶法。凝胶法是将等体积的供

试品溶液和新配制的鲎试剂（TAL）溶液在试管中混匀，一般各0.1ml，（37±1）℃反应（60±2）min。

如果被检测的溶液不含干扰凝集反应的因素，且其含有内素素浓度等于或大于所用鲎试剂的灵敏度（λ）时，

就会在试管中显示阳性反应，即形成凝胶；否则呈阴性反应，即呈澄明溶液或轻度混浊，视内毒素的浓度

而定［1］。该反应极其灵敏，凝胶形成速率与内毒素浓度成正比，并受温度、反应物中Ca2/Mg2离子浓

度和pH等因素的影响［3］。同样，《中国药典》2000年版也只采用凝胶法。淘金者.

1.2凝胶法鲎试剂与内毒素反应的机理见图1。

图1凝胶法鲎试剂与内毒素反应的机理（略）

2影响细菌内毒素检查的因素

2.1检品的干扰pH值、离子浓度以及某些干扰成分，都会影响到检查结果的准确性，得到所谓“假阳

性”或“假阴性”结果。只有证实检品对凝集反应无干扰之后，检查的结果才是可信的。判断检品是否有干扰

要做检品的干扰实验。

2.2鲎试剂的非特异性内毒素不是唯一能激活鲎试剂凝集系统的物质，还有其他物质可以通过G因子

这个“旁路”激活鲎试剂的凝集系统。因此鲎试剂并不是专一对内毒素反应的试剂。由旁路反应产生的阳性

结果称细菌内毒素检查的“假阳性”。

3特殊值的确定

3.1药品的内毒素限值（L）药品细菌内毒素检查是一种限度实验，首先必须确定供试品的细菌内毒素

限值。当供试品含内毒素低于这个限值时，按规定给药途径用药，就不会引起致热原反应；相反就有可能

引起热原反应［1］。药品细菌内毒素限值确定的方法有3种。

3.1.1药典给出药典规定细菌内毒素检查的品种，在药典正文可以查到相应的L值。《中国药典》1995

年版规定了12种注射剂的L值，2000年版规定了47种注射剂的L值，USPXXⅢ规定了471种注射剂的L

值。

3.1.2根据热原检查的兔剂量计算L=K/M，M规定的给药途径，药品的家兔注射剂量，以ml/kg，mg/kg，

μ/kg等表示；K为规定的给药途径；临床无任何不良反应的内毒素阈值，以Eu/kg表示。静脉（包括im，

ip，sc，ia）：5.0Eu/kg；放射性药品：2.5Eu/kg；鞘内：0.2Eu/kg。

3.1.3根据人的最大注射剂量计算L=K・W/M，M为规定的给药途径，人的最大注射剂量同样以ml/kg，

mg/kg，μ/kg等表示；W为人的平均体重，中国成人按60kg计算。

3.2药品的最大有效稀释（MVD）做药品的细菌内毒素检查时，当品种的L值与所选用的鲎试剂灵敏

度（λ）相等时，若经干扰实验证实无干扰，可以直接检查。但许多药品的L值往往大于鲎试剂的灵敏度（L

＞λ），在这种情况下，若直接检查，得到阳性结果并不能说明该药品的内毒素含量超过限值。因此，当L

＞λ，需要对检品作适当的稀释，但稀释的倍数不能超过一个有效的限度，这就是“最大有效稀释”，用MVD

表示。其计算公式如下：MVD=L/λ。