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细菌内毒素检查法的正确理解

·如何全面理解细菌内毒素检查法中污染物对试验结果的影响？

·如何正确认识器皿洗涤的重要性？

·如何正确理解鲎试剂的抗干扰能力和鲎试剂的特异性？

许多客户对污染的认识是不全面或错误的，他们认为在细菌内毒素检

查过程中，器皿被污染的结果必然导致阳性结果的出现，但试验结果正好

与他们的认识有时正好相反，可能阳性对照全为阴性，对此亦有百思不得

其解。要正确理解这个问题，首先要正确理解鲎试剂与内毒素的反应机理，

鲎试剂与内毒素的反应为一系列酶反应，生物酶反应受许多因素的干扰。

在日常工作中，我们要特别注意一些因素对试验结果的影响，如PH值、

器皿的洁净度以及环境因素等。

图1鲎试剂与内毒素的反应机理

1、PH值：鲎试剂生物活性在pH6-8时酶活性稳定；pH≤3或≥10

时，酶活性受到抑制。故鲎试验时，供试品pH最好应预调和6.8-8.0为

好，必要时可用无内毒素的HCl或NaOH稀溶液调节pH值。

2、器皿：内毒素稀释不宜用注射器，而应用经过校正的刻度玻璃吸

管。因为注射器刻度准确度差，而且针栓壁磨沙面易吸附内毒素，试验误

差大。同时要特别注意注射器针头引入的铁离子对试验结果的干扰，铁离

子对鲎试验反应有较强的抑制作用。操作中常用的聚丙烯塑料管可能干扰

试验结果，故宜慎用。

3、金属阳离子：离子对细菌内毒素测定结果影响较大，一方面阳离

子如Fe3+、Al3+强度较大会引起内毒素的聚集造成内毒素局部浓度过高，同

时还必须注意高价阳离子（如Fe3+）对鲎试剂酶反应具有强抑制作用；另

2+2+

一方面鲎试剂必须在二价阳离子Ca、Mg的参与下才能被激活形成凝胶反

2+2+

应。许多药物因PH值≥10时，其中的阴离子会吸收鲎试剂中的Ca、Mg

离子，使实验呈假阴性。

4、其它物质：如血液中的凝血因子、络合剂、抗凝剂等，都可能干扰

鲎试剂与内毒素的反应，同时消毒剂和有机溶剂对鲎试验都有抑制作用。

一、器皿洗涤的重要性

《中国生物制品操作规程》389页——细菌内毒素检查法“玻璃器皿的

洗涤”规定：“将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并烘干水分后，

置洗液中浸泡4小时，取出将洗液沥干，用自来水将残余的洗液洗净，再

用新鲜蒸馏水冲洗干燥（禁用超纯水或久置的蒸馏水冲洗）后置适宜的密

闭金属容器中，迅速置烤箱中，除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒

素。”应特别注意，该规程明确规定最后冲洗玻璃器皿必须“用新鲜蒸馏

水冲洗，禁用纯化水和久置的蒸馏水冲洗。”有的客户使用反渗透制备的

纯化水冲洗试验用玻璃器皿，结果试验中所有的阳性对照都为阴性，复核

鲎试剂灵敏度时试验结果误差较大，这主要是由于纯化水和蒸馏水内在质

量不同所造成的。因纯化水中存在的阴阳离子经250℃高温干烤不能完全

被破坏，这时不同的离子就产生对鲎试剂酶反应抑制或增强的反应，为了

保证试验结果的准确性和检验报告的权威性，我们应该严格遵守操作规

程，用新鲜多效蒸馏水冲洗鲎试验用玻璃器皿。

二、抗干扰能力和鲎试剂的特异性

有客户在做白蛋白的干扰试验时使用两个厂家的鲎试剂，干扰试验结

果其中一个厂家的鲎试剂需要稀释4倍而另一个厂家的鲎试剂需要稀释8

倍才能排除干扰。据此向我们咨询是否稀释倍数小的鲎试剂抗干扰能力

强？而稀释倍数大的鲎试剂抗干扰能力就差？我们认为对一些粘度较大

的产品白蛋白、医用透明质酸钠，建议使用8倍或16倍稀释来建立内毒

素常规检查规程（SOP），因为鲎试验是一种复杂酶反应，任何一种药品、

生物制品的浓度或粘度对试验结果皆有影响，是抑制还是增强反应仍需做

具体的分析。单纯以干扰试验的稀释倍数来判断鲎试剂的质量是片面的。

如何判断鲎试剂