细胞培养技术课件.ppt

小结一实验设备及功能?超净工作台，生物安全柜------操作平台（酒精灯安全）?CO2培养箱-------------------------细胞生长的空间?倒置显微镜-------------------------观察细胞?离心机-------------------------------离心收集细胞?电热恒温水槽----------------------加热?液氮罐-------------------------------冻存细胞?纯水仪-------------------------------制备一级水?压力蒸汽消毒器--------------------灭菌?电热干燥箱-------------------------烘干器皿二试剂及耗材o耗材?培养基?缓冲液?消化液?血清?其他培养基供给细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。成分及作用：?氨基酸：组成蛋白质的基本单位?碳水化合物：能量来源?无机盐：帮助细胞维持渗透压平衡?维生素：维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用培养基分类美国模式培养物集存库ATCC?DMEM（高糖，葡萄糖4500mg/L）：成纤维、上皮细胞（293），一些实体瘤（Panc-1），原代神经元?DMEM（低糖，葡萄糖1000mg/L）：间充质干细胞，单抗细胞融合?RPMI1640：血液细胞（HL60）、一些实体瘤细胞（BT474）酚红：PH指示剂（黄色过酸、紫色过碱）；酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素），涉及到激素和诱导的实验，建议选用无酚红培养基。缓冲液（洗涤细胞）PBS：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液（常规实验皆可用）。（Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl）D-PBS：杜氏磷酸缓冲液，磷酸盐含量稍低，含有钙镁离子，用于胚胎学方面的研究。Hanks：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物细胞的水平，可作为动植物细胞短期培养(几个小时)。D-Hanks：不含钙离子、镁离子、葡萄糖（使用消化液时）。消化液?胰蛋白酶溶液使细胞间蛋白质水解、细胞离散。使用浓度0.25%。配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清（对胰酶产生抑制作用）的平衡盐溶液（如PBS、D-Hanks）。?EDTA溶液一般用其钠盐，可溶性较好。有些组织需要Ca2+、Mg2+来保持其完整性，EDTA可以螯合这些离子，可使细胞之间裂解。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡盐溶液配制。?胶原酶溶液主要水解结缔组织中胶原蛋白成分（用胰蛋白酶效果较差），使用Hanks溶液配置，常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）。血清提供基本营养物质、激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。?保存血清最好的方法？建议血清保存在-20℃。解冻后存放于4℃时，请勿超过一个月。（分装）?如何解冻血清才不会使产品质量受损?建议从冷冻箱取出后，置于2～8℃冰箱使之缓慢解冻、融解。使用时，必须将解冻的血清充分混匀，并且勿将血清置于37℃太久。青霉素-链霉素溶液青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。分别阻止细菌细胞壁合成及细菌蛋白质的组成，达到抑制细菌生长的作用，防止污染，对真菌和支原体无效。其他实验所需的试剂：药物（如ATRA）、检测试剂（如MTT）、细胞因子（如SCF）等试剂标注规范????试剂名称配制浓度配制人配制日期NaCl0.5mM张三2016.10.21耗材????培养皿、瓶、孔板离心管、移液管枪尖其他小结二试剂及耗材的分类及用途o耗材（分类、用途）?培养基（成分、分类）?缓冲液（PBS、Hanks等）?消化液（分类及应用）?血清（作用、存储及解冻方法）?试剂标签要规范三清洗及灭菌?在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感,均能影响培养细胞的生长?微生物产品附带杂物?上次细胞残留物