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读懂流式细胞术
流式细胞术,顾名思义,是研究细胞的一种技术,但是它的研究
对象绝对不仅仅局限于真核细胞,还可以研究细菌、病毒以及各种蛋
白等等。无论你是基础科研工作者还是临床医生,你都用得上这项技
术。
自1974年BD公司和斯坦福大学联合研制出世界上第一台商用流
式细胞仪以来,作为集N个学科的智慧于一身,将计算机技术、电子
工程、数学、光学、流体力学和有机化学等学科巧妙融合起来而诞生
的这台仪器—流式细胞仪在免疫学、细胞生物学、发育生物学、细胞
动力学、生理学、分子生物学等生物学和医学研究的各个领域得到了
广泛的应用。
这一技术不仅仅为科研、临床及教学等不同领域的研究工作提供
了强有力的工具,而且为医疗和农牧业生产等应用领域提供了及其重
要的支持。接下来让解螺旋带大家一起来学习一下,流式细胞术是个
什么东东?它能做什么?以及,怎么做?
首先我们来瞻仰一下老祖宗们通过思想火花的碰撞以及孜孜以求
互相借鉴最后化茧成蝶孕育了流式细胞仪的艰难历程:
从此流式细胞术的发展就狂奔在了康庄大道上,应用可谓遍地开
花。
接下来,我们来一起学习一下流式细胞仪的工作原理:在一定的
压力下,鞘液带着细胞或者微粒通过喷嘴中心进入到流式照射室,在
流式照射室的分析点,激光照射细胞并发生散射和折射,发射出散射
光,同时被荧光标记的颗粒发射出荧光。散射光和荧光分别被不同的
检测器接收,通过光电倍增管将检测到的荧光信号转换成电信号,这
些电信号放大后再经过数据化处理输入电脑,供我们进行分析。原理
如下,一图读懂流式细胞仪:
了解了流式细胞仪的原理,最最重要的是,对不同专业不同背景
的我们来说,流式细胞术,到底能干什么呢?
第一、流式细胞术可以用来检测细胞表面以及胞内的各种标志,
对细胞进行分群鉴定以及各种蛋白表达量高低的比较。比如CD3是T
细胞的标志、CD19是B细胞的标志、EpCAM是上皮细胞的标志等。
不仅仅是免疫细胞,其他的如肿瘤细胞、成纤维细胞、干细胞等都可
以用流式细胞术进行检测。实体组织只要经过处理后制成单细胞悬液
也能用流式细胞术进行分析和分选。如果你是一名临床医生,想比较
不同治疗方式的患者预后跟治疗方案有什么关系,想通过外周血进行
分析的话,流式细胞术可以派上大用场,比如可检测不同治疗方案的
患者其外周免疫格局发生了什么变化。
第二、通过标记Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相关基因,
流式细胞术可用来检测细胞的增殖以及凋亡。此外还有CFSE、以及
PI-annexinV等染料,可用来进行增殖和凋亡分析,在药物对肿瘤影
响的研究过程中应用广泛。
第三、流式细胞术可用来分析细胞周期。细胞核DNA含量随着细
胞增殖周期时相的不同而发生变化,用DNA染料进行染色,DNA含
量多,荧光信号强,DNA含量少,荧光强度低。通过对细胞瞬间的快
速测定,判断细胞所处的细胞周期时相,并分析群体细胞中处于不同
周期时相的细胞比例,以研究细胞的周期,DNA复制和染色体倍性等。
在肿瘤学研究中尤其常用,可以此来判断药物对肿瘤细胞影响、肿瘤
的生长速度与患者预后等。
第四、流式细胞术可用于疾病诊断中病原微生物的检测,以及环
境中饮用水、湖泊、河流、原油中的微生物和海洋微生物检测等。
第五、流式细胞术还可用于农林畜牧养殖业,如依据DNA含量,
用于玉米、向日葵、葡萄等的倍性鉴定,分选X、Y精子以控制家畜性
别。
除了以上最常用的几个方面,还有很多其他的高逼格用法。如流
式微球阵列(cytometricbeadarray)检测可溶性蛋白,也称CBA法,
通过不同的CBA试剂盒,将捕获微球包被上不同的抗体,对可溶性蛋
白进行检测,类似于今天的luminex法,对于稀有样本的检测具有很
大的优势。与luminex不同的是,它不需要额外购买检测仪器,只要
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