T∕SAIA 004-2021 猪瘟病毒PPA-ELISA抗体检测方法.pdf

ICS65.020.20

B38

团体标

准

T/SAIA004-2021

猪瘟病毒PPA-ELISA抗体检测方法

PPA-ELISAtodetectantibodyagainstclassicalswinefevervirus

2021-12-20发布2021-12-20塞盛

山东省农业产业化促进会发布

前

本文件核~~GB厅l.J-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则）〉给出

的规则起草。

本文件白山东省农业产业化标准委员会提出并归口。

本标准ml直在单位：山东省滨州畜牧兽医研究院、山东绿都生物科技有限公司、滨州市农业技术

推广中心、日照市东地区司J物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：王金良、沈志强、孟卫芹、谢金文、李娇、高青华、董事~、肖跃强、刘通、

陈金龙、1ii:炳梅、许祭友、姚春阳、魏凤、马力、李坤林。

猪瘟病毒PPA-ELISA抗体检测方法

1.范围

本标准规定了猪瘟病毒抗体PPA-ELISA检测方法。

本标准适用于猪、兔等动物猪瘟病得抗体检测，但无法区分疫苗抗体和l野草等感染抗体。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本

文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单〉适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和l试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

a术语和定义

下列缩赂i否适用于本文件。

CSFV：猪瘟病毒（ClassicalSwineFeverVirus)

ELISA:酶联免疫l吸附试验（Enzyme-LinkedlmmunosorbentAssay)

HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase)

SPA：葡萄球菌A蛋白（StaphylococcalProteinA)

PPA：辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋臼（HRP-SPA)

OD：光密度（OpticalDensity)

4设备和.材

4.1微量移液器（最大量程分别为10~1L、20~LL、100~IL、1000~1L)。

4.2离心机（离心速度可达6000r/min以上〉。

4.337。C温箱。

4.4酶标读数仪（包摇450nm波长〉。

4.5一次性注射器（5mL～IOmL）。

5试剂

5.1猪瘟禽.E2重组蛋白

究院猪瘟病毒E2抗原优势区基｜主｜，用pET32a（÷〉表达载体进行表达，亲和层析法纯化重组蛋

白。获得重组蛋臼纯度应注95%。见附录A.

5.2标准阳性血清

猪瘟疫苗免疫仔猪’制备，免疫前荧光抗体病毒中和试验检测为阴性，免疫后猪’痕抗体正向间接

血凝效价达到l:28以土。

5.3标准阴性血清

无匈游、抗体、未免疫猪瘟疫苗的仔猪血清，经荧光抗体病毒中和试验检测为阴性。

5.4.包被液：见附录B.I.

5.520×浓缩洗涤液：见B.2.

5.6封闭液：见B.3.

5.7.样品稀释液：见B.4。

5.8HRP-SPA稀释液：见B.5。

5.9酶标结合物：商品化的HRP标记的葡萄球菌A蛋白。

5.10.底物液A：见B.6.

5.11底物液B：见B.7。