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抗氧化酶液（SOD、CAT、APX、POD）可以统一提取
称取叶片0.5g，加5ml（1+4）提取液PH7.8Pbs，冰浴研磨，12000g，4℃，20min，上清液
即为粗酶提取液。同时酶液可用于测定可溶性蛋白含量和超氧阴离子自由基的含量！注意
CAT反应液和APX反应液要现配现用！
注：粗酶提取液要全部转移；加入石英砂后离心需配平
1.SOD(超氧化物歧化酶)测量
取透明度好的指形管，按下表加入各溶液：
试剂（酶）用量（ml）
0.05M磷酸缓冲液（PH7.8）1.5
65mMMet溶液0.3
500uMNBT溶液0.3
100uMEDTA-Na0.3
2
200uM核黄素0.3
酶液0.1（对照管加缓冲液）
蒸馏水0.5
总体积3.3
混匀后将一支对照管置暗处作空白对照，其余各管于4000lx光下反应20-30min，反应结束
后，以不照光的对照管为空白，560nm测定OD值。按下式计算SOD活性。
SOD总活性=[(A-A)×V]/[A×1/2×W×a]
CKECK
SOD比活力=SOD总活性/蛋白质浓度
SOD总活性以每克鲜重每单位表示：比活力单位以酶单位/mg蛋白表示
A—照光对照管的消光度值
CK
A—样品管的消光度值
E
V—样液总体积（ml）
a—测定时样品用量（ml）
W—样重（g）
蛋白质浓度单位为：mg蛋白/g样重。
【试剂配制】
磷酸缓冲液配制：
母液：A：NaHPO•12HO36g，稀释至500ml
242
B：NaHPO•2HO15.92g，稀释至500ml
242
提取液配制：取0.0186gEDTA（0.1mM），5gPVP（1%（g/ml））,用磷酸缓冲液（PH7.8）
稀释至500ml。
PH7.8Pbs配制：A114.35ml+B10.625ml，定容至500ml。
PH7.0Pbs配制：A152.5ml（76.25ml）+B97.5ml（48.75ml）稀释至1000ml（500ml）。
65mmol/LMet:取0.97gMet用磷酸缓冲液（PH7.8）定容至100ml；
500umol/LNBT:取0.0409gNBT用磷酸缓冲液（PH7.8）定容至100ml（避光保存）；
100umol/LEDTA-Na:0.03721g（0.0186g）EDTA-Na磷酸缓冲液（PH7.8）定容至1000ml
22
（500ml）；
200umol/L核黄素：0.0753（0.03765）g核黄素磷酸缓冲液（PH7.8）定容至1000ml（500ml）；
（现用现配）
注：若要抑制Cu-Zn/SOD的活性，可加入30mM的KCN0.3ml；若要抑制Cu-Zn/SODFe-SOD
的活性，可加入50mM的HO（0.52ml30%的H2O2稀释至100ml）0.3ml；
22
2.CAT（过氧化氢酶）
CAT反应液：0.28ml30%的HO用pH7.0的磷酸缓冲液稀释至250ml。（HO为10mM）。
2222
0.1ml酶提取液+2.9mlCAT反应液，240nm比色，（10s∕20s）。
3.APX
如果是长期保存的材料，则
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