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灵芝多糖的提取

近年来,药理学和免疫学的多方研究表明,灵芝多糖芝扶正固本最有效的成分之一,具有广

泛的药理活性,排毒、抗放射,提高肝脏、骨髓合成dna、bna的能力,抗肿瘤增强机体免

疫等效果。因此多糖的提取为广大科研人员药研制者所重视,他们不断研究和探索灵芝多糖

提取的方为弄清灵芝多糖的化学成分提供有力的理论依据,同时为许多疾病患者带来福音。

一、灵芝茵丝体多糖的提取

(一)材料

1.菌种:湖南省食用菌研究所提供的韩国灵芝母种。

2.种子培养基:玉米粉2%大米粉2%

蔗糖2%磷酸二氢钾o.1g

硫酸镁0.05%ph值自然

3.发酵培养基:麦麸浸出液10%葡萄糖2%

硫酸铵0.2%

磷酸二氢钾0.2%ph值自然

(二)方法

1.种子培养:

2.发酵培养生产菌丝体。

3.测定干、湿菌丝体。

将发酵液进行离心,然后取其沉淀物,加人60%蔗糖,进行高速(3000转/分)密度

梯度离心5分钟,取上层菌丝体,洗净蔗糖再压干,即得湿菌体,然后再将湿菌体于高温下

烘干即为干菌体。分别称取其重量。

4.多糖的提取。

(1)菌丝体预处理。取适量的灵芝湿菌体,用乙醇等有机溶剂进行处理,以除去湿菌

体中的脂类物质,同时使糖苷酶失去活性,防止多糖的降解。

(2)用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体,放人1:20的热水(95℃)中

浸提,一次3小时,连续浸提3次,合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积,再用3

倍体积的95%乙醇混合,静置10-12小时,再离心,最后加入75%的乙醇反复洗涤,以沉

淀多糖。此沉淀物为粗多糖,其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质,一般要经过

纯化。

(3)多糖的纯化,去蛋白质和deae纤维素柱层析。去蛋白质一般采用sevag法:加入

0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离,直至氯仿与水

的界面无沉淀为止,且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用

硼酸型deae纤维素柱层析法:取脱蛋白后的多糖,分别以0.025mol/l、0.1mol/l的硼砂,

0.1mol/l的氢氧化钠溶液进行洗脱,然后用0.2%恿铜硫酸液比色测定吸收度,收集有多糖

的洗脱液,再浓缩脱盐即得所需的多糖。

(4)多糖纯度的鉴定。

可用电泳法进行鉴定,如果存在单一带,说明为纯多糖。

5.多糖与多糖中蛋白质含量的测定:

取一定量菌丝体粗多糖,加水煮沸溶解,用sevag方法脱去蛋白考马斯亮兰法测其粗多

糖中蛋白质和多糖的含量。测得菌丝体中粗多糖含17.01%、多糖含5.43%、蛋白质含量

2.16%。

二、灵芝子实体多糖的提取

(一)材料

1.菌种:韩国灵芝栽培种。

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