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鱼胰岛素抗体（INS-Ab）ELISA试剂盒使用方法

鱼胰岛素抗体（INS-Ab）ELISA试剂盒实验原理

 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-2（IL-2）水平。用纯

化的人白细胞介素-2（IL-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的

微孔中依次加入白细胞介素-2（IL-2），再与HRP标记的羊抗人受体结合，形

成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在

HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深

浅和样品中的白细胞介素-2（IL-2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定

吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-2（IL-2）含量。

 试剂盒组成

 1

 20倍浓缩洗涤液

 50ml乘以1瓶

 7

 终止液

 6ml乘以1瓶

 2

 酶标试剂

 6ml乘以1瓶

 8

 标准品（12mu;g/L）

 0.5ml乘以1瓶

 3

 酶标包被板

 12孔乘以8条

 9

 标准品稀释液

 1.5ml乘以1瓶

 4

 样品稀释液

 6ml乘以1瓶

 10

 说明书

 1份

 5

 显色剂A液

 6ml乘以1瓶

 11

 封板膜

 2张

 6

 显色剂B液

 6ml乘以1/瓶

 12

 密封袋

 1个

 鱼胰岛素抗体（INS-Ab）ELISA试剂盒标本处理及要求

 1．血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定；

 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活

性。

 3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，

但应避免反复冻融。

 操作步骤

 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分

别加标准品100mu;l，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50mu;l，混匀；

然后在*孔和第二孔中先各取50mu;l弃掉；再各取50mu;l分别加到第三孔

和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50mu;l，混匀后，再各取

50mu;l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液

50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50mu;l分别加到第七、第八孔

中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50mu;l，混匀后从第七、第八

孔中分别取50mu;l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释

液50mu;l，混匀后从第九第十孔中各取50mu;l弃掉。（稀释后各孔加样量

都为50mu;l，浓度分别为8mu;g/L，4mu;g/L，2mu;g/L，1mu;g/L，

0.5mu;g/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余

各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液

40mu;l，然后再加待测样品10mu;l（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样

品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板

后置37℃温育30分钟。配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃

去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50mu;l，空白孔除外。

温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50mu;l，再加

入显色剂B50mu;l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止

液50mu;l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波

长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根

据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的

浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程

式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

 注