米氏常数测定(精)说课讲解.ppt

米氏常数测定(精);Km的意义

Km是酶的特性常数之一，不同的酶Km值不同，同

一种酶与不同底物反应Km值也不同。

Km值可近似的反应酶与底物的亲和力大小：Km

值大，表明亲和力小；Km值小，表明亲和力大。

测定Km值是酶学研究的一个重要方法。;米氏方程：

V[S]

v=Km+[S]

v:反应初速度（微摩尔浓度变化/min)

V:最大反应速度（微摩尔浓度变化/min)

[S]：底物浓度（mol/L)

Km:米氏常数（mol/L)

此方程表明，当已知Km及V时，酶反应速度与底物浓度之间的定量关系。;双倒数作图法测定Km值：

1Km11

vV[S]V;胰蛋白酶的性质;氨基的测定

甲醛滴定法;试剂和器材;1．取50mL三角瓶4个，加入5mL甲醛与1滴酚酞，以0.1M标准NaOH滴定至微红色，4个瓶颜色应当一致，编号。

2．量取40g/L酪蛋白50mL，加入一150mL三角瓶，37℃保温10分钟，同时胰蛋白酶液也在37℃保温10分钟，然后吸取5mL酶液加到酪蛋白液中。（同时计时！）充分混合后立即取出10mL反应液（定为0时样品）加入一含甲醛的小三角瓶中（1号）加10滴酚酞；以0.1MNaOH滴定至微弱而持续的微红色。在接近终点时，按耗去的NaOHmL数，每mL加一滴酚酞，再继续滴至终点，记下耗去的0.1M标准NaOHmL数。;3．在2分钟、4分钟、6分钟时，分别取出10mL反应

液，加入2号、3号、4号小三角瓶，同上操作，记下耗

去NaOHmL数。

以滴定度（即耗去的NaOHmL数）对时间作图，

得一直线，其斜率即初速度为V40（相对于40g/L

的酪蛋白浓度）。

然后分别量取30g/L、20g/L、10g/L的酪蛋白溶

液，重复上述操作，分别测出V30、V20、V10。

利用上述结果，以1/v对1/[s]作图，即求出V与

Km值。

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