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附件：双价人乳头瘤病毒疫苗（大肠埃希菌）公示稿

双价人乳头瘤病毒疫苗（大肠埃希菌）

ShuangjiaRenRutouliuBingduYimiao(Dachangaixijun)

RecombinantHumanPapillomavirusBivalent(Types16,18)Vaccine(Escherichiacoli)

本品系由大肠埃希菌分别表达的重组人乳头瘤病毒（HumanPapillomavirus,HPV）16型18型的

L1蛋白经纯化、组装成病毒样颗粒（Virus-likeParticle,VLP），并加入铝佐剂制成单价吸附原液，以适

宜比例混合后分装制成。用于预防因16型、18型人乳头瘤病毒所致的持续感染以及相关疾病。

1.基本要求

生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

16型18型菌种、单价原液、单价吸附原液的制造和检定均按照相应要求分别执行。

2.制造

2.1生产用菌种

2.1.1名称及来源

以DNA重组技术构建的分别表达HPV16、HPV18L1蛋白并经批准的重组大肠埃希菌工程菌株。

2.1.2种子批的建立

应符合“生物制品生产用菌毒种管理及质量控制（通则0233）”规定。

主种子批和工作种子批的代次应符合批准的要求。

2.1.3种子批菌种的检定

主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.1.3.1~2.1.3.8项检定。

2.1.3.1培养物纯度

将培养物接种于LB琼脂平板，或其他适宜的培养基，于适宜条件下培养，应呈典型大肠埃希菌集

落形态，无其他杂菌生长。

2.1.3.2染色镜检

以革兰氏染色法或其他批准方法进行检查，在显微镜下观察，应为典型的革兰氏阴性杆菌。

2.1.3.3对抗生素的抗性

将培养物以平板涂布法接种于含有与批准一致的抗生素的LB琼脂平板，于适宜条件下培养，观察

其生长情况，应为典型大肠埃希菌集落形态，即具有对相关抗生素的抗性。

2.1.3.4目的蛋白表达量

取种子批菌种摇瓶培养，取培养物进行适宜处理后，照免疫化学法（通则3429标记免疫化学法

一）分别对相应型别的目的蛋白表达量进行测定。分别以相应型别的目的蛋白含量标准品吸光度对应其

相应的浓度计算线性回归方程，由回归方程分别计算两个型别菌种的L1蛋白表达量。菌种目的蛋白表

达量应符合批准的要求。

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2.1.3.5质粒检查

取种子批菌种扩增培养，采用适宜的方法提取质粒后，以酶切法或其他批准方法进行检查，重组质

粒的酶切图谱应与原始重组质粒的图谱相符。

2.1.3.6质粒保有率

照质粒丢失率/保有率检查法（通则3406）试验，质粒保有率应不低于95%。

2.1.3.7生化反应

照经批准的方法进行检查，应符合相应的大肠埃希菌生化反应特性。

2.1.3.8表达的目的蛋白型别

分别取HPV16型HPV18型种子批菌种摇瓶培养，取培养物进行适宜处理后，照免疫化学法（通

则3429标记免疫化学法一）进行试验，分别对表达的目的蛋白型别进行检查。HPV16型供试品溶液为

阳性，即证明HPV16菌种表达的目的蛋白为HPV16型别；HPV18型供试品溶液为阳性，即证明

HPV18菌种表达的目的蛋白为HPV18型别。

2.1.3.9目的基因核苷酸序列

以DNA测序技术进行检查，HPV16型HPV18型的目的基因核苷酸序列应分别与批准的序列一

致。

2.1.3.10电镜检查

使用透射电镜进行检查，应为典型大肠埃希菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。

2.1.4菌种保存

菌种应于液氮中保存或按批准的条件保存。

2.2单价原液

2.2.1发酵

取单价工作种子批菌种，培养发酵后收获菌液。培养过程中不添加任何抗生素。

2.2.2培养物检定