管碟法测定抗生素效价详解说课讲解.ppt

管碟法测定抗生素效价详解;2.抗生素的效价和单位

抗生素的含量用效价和单位表示。该词有时不加区别统称为效价单位。

效价（ｐotency），指检品的实际单位数与其标示量的比值。常表示为效价的百分数。

单位（unit,u）单位是衡量抗生素有效成分的具体尺度。

;（１）重量单位以抗生素的生物活性部分重量作单位

１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单位。

（２）类似重量单位以特定的纯粹抗生素盐类的重量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。这是根据国际使用习惯而来的。

（３）质量折算单位以特定的纯抗生素盐的质量为单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位

（４）特定单位以特定的抗生素标准品的某一质量定为一单位。

;管碟法

浊度法

;1、管碟法：是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内呈球面形扩散，形成含有一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出的透明抑菌圈。此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈面积呈线性关系，通过比较

标准品与供试品产生抑菌

圈的大小，计算出供试品

的效价。

;;管碟法测定抗生素效价

原理和方法;2.原理－抑菌圈的形成;一、试验前准备;双碟的挑选;物品的清洗、灭菌;牛津杯的挑选;缓冲液的制备;基本要点：①高剂量抗生素溶液所形成的抑菌圈直径在18～22mm；②高、低剂量所形成的抑菌圈之差最好大于2mm，有些抗生素的差数可较小；③高、低剂量之比一般用2:1，当高、低剂量所致的抑菌圈差别较小时，可用高低剂量之比为4:1的比率。;仪器与用具

1.操作室

2.双碟

3.陶瓦盖

4.钢管

5.钢管放置器

6.恒温培养箱

7.灭菌刻度吸管

8.玻璃容器

9.称量瓶

10.毛细滴管或可调式移液器（1～1000μl)

11.天平

12.抑菌圈(直径)测量仪。

13.超净工作台用于菌种的接种或传代。超净工作台须置洁净工作室或半无菌室内。;?

检定菌的来源：检定菌种由中监所所提供的冷冻干燥品。

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检定菌的传代和接种：

?芽胞杆菌3～6个月（其他细菌每个月）用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用（阳性对照）菌种。传代和接种在菌种接种室内按无菌操作要求进行。

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冷冻菌种安瓶的接种。

用75%酒精棉擦净菌种安瓿的外壁，稍干。点燃酒精灯，将安瓿的封口，一端在火焰上烧灼红热用毛细管吸取灭菌水少许在灼热处，使其骤冷而炸裂，另取1支灭菌毛细滴管，在火焰旁吸取少量灭菌水，加至菌种管底部，将冻干菌块搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面，将营养琼脂斜面琼脂斜面于37℃恒温培养24小时。;管碟法的操作步骤;预试验：

确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：高剂量浓度溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm。高剂量与低剂量的抑菌圈直径之差最好不小于2mm。

高低剂量之比为2:1（如高、低剂量所致的抑菌圈差别较小时，可用4:1的剂量比率）。

;试验准备：

双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。;供试品、标准品溶液的制备：

估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。;;2.稀释稀释操作应遵照容量分析的操作规程。

从冰箱中取出的标准溶液，必须先在室温放置，使其温度达到室温后，方可量取。标准品与供试品溶液的稀释应采用容量瓶，每步稀释，取样量不得少于2ml为宜，稀释步骤一般不超过3步。举例：取浓溶液1000u/ml。第一步取5ml（1000U/ml）→50ml容量瓶→100U/ml；第二步取5ml（100u/ml）→50ml容量瓶→10U/ml（H）；取5ml（100U/ml）→100ml容量瓶→5U/ml（L）。

每次吸取溶液用刻度吸管，量取溶液前要用被量液流洗吸管2～3次，吸取样品溶液后，用滤纸将外壁多余液体擦去，从起始刻度开始放溶液。稀释标准品与供试品用的缓冲液应同一批和同瓶，以免因pH或浓度不同影响测定结果。稀释时，每次加液至容量瓶近刻度前，稍放置片刻，待瓶壁的液体完全流下，再准确补加至刻度。;3．双碟的制备在半无菌室内