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小鼠过氧化氢酶的制备与测定

前言

过氧化氢酶是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞

的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶,约占过

氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物

的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品

工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢

酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。

过氧化氢酶(CAT)是一种酶类清除剂，又称为触酶，是以铁

卟啉为辅基的结合酶。它可促使HO分解为分子氧和水，清除

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体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受HO的毒害，是生物防

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御体系的关键酶之一。CAT作用于过氧化氢的机理实质上是

HO的歧化，必须有两个HO先后与CAT相遇且碰撞在活性

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中心上，才能发生反应。HO浓度越高，分解速度越快。

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几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。其普遍存在于能

呼吸的生物体内，主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、

动物的肝和红细胞中，其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机

理。CAT是红血素酶，不同的来源有不同的结构。在不同的组织

中其活性水平高低不同。过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心

脏等器官快，就是因为肝中的CAT含量水平高。

过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶

中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。

在纺织工业中，过氧化氢酶被用于除去纺织物上的过氧化氢，以

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小鼠过氧化氢酶的制备与测定

保证成品是不含过氧化物的。它还被用在隐形眼镜的清洁上：眼

镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡后，使用前再用过氧化氢酶除

去残留的过氧化氢。近年来，过氧化氢酶开始使用在美容业中。

一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢，目的是增加表皮上层的

细胞氧量。

本实验所提取的过氧化氢酶来源于小鼠，其分子量约为

238KD，结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成，是以铁卟啉

为辅基的结合酶，在407nm波长下有特征性的吸收。溶于水,

几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂，酸性环境下溶解度低

易析出，最适温度为37℃，最适pH值约为7.8。本实验以小鼠

肝脏为原料，根据过氧化氢酶溶解性和大分子等特性，通过组织

匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤，提取纯化过氧化氢酶，

并对制备的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等测定。

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小鼠过氧化氢酶的制备与测定

目录

一、实验方案

二、实验目的

三、实验原理

四、实验过程

五、实验结果

六、实验讨论

七、注意事项

八、结果误差分析

九、结语

十、致谢

主要参考资料

【附】

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小鼠过氧化氢酶的制备与测定

一、实验方案:

匀浆

制备过氧化氢酶盐析