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实验1可溶性糖的测定

一、实验目的

1．学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。

2．学习721型分光光度计的原理和操作方法。

二、实验原理

总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可

部分水解为葡萄糖的淀粉。

蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。

其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮（CHO）

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缩合成蓝色化合物。溶液含糖量在150μg/ml以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成

正比。

蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接作用，样品不必经过水解。

三、实验器材

1．试管（或具塞试管）2.吸量管及试管架（1ml、10ml）3．沸水浴4.冰浴

5．721型分光光度计

6．蒽酮试剂

称取100mg蒽酮溶于100ml98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。

7．葡萄糖标准溶液（100μg/ml）200ml

精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000ml。

8．样品溶液200ml可自选待测物制成样品溶液。

举例：称取500g市售白薯（或淀粉），洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱

布压滤、弃滤液溜渣，将渣放于烘箱内80～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，

过筛，取100目筛下物为待测样品。

取样品在烘箱内105℃烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80ml沸

蒸馏水，放入沸水浴。不时摇动，提取0.5h。取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并

过滤，合并滤液。冷却至室温，用蒸馏水定容至100ml。

9．白薯。

四、实验步骤：

1．制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。

编号

1234567

试剂(ml)

葡萄糖标准液（100μg/ml）00.10.20.30.40.60.8

HO1.00.90.80.70.60.40.2

2

蒽酮试剂10101010101010

1

每管加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，

同时置于沸水浴中，准确加热7min，立即取出置冰浴中迅速冷却。待各管溶液达室温后，

用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，迅速测其余各管的光吸收值。然后以第2～7管溶

液含糖量μg为横坐标，吸光度（OD）为纵坐标，画出含糖量与OD值的相关标准曲

620620

1要在冰浴条件下加入蒽酮，以防止发热，影响颜色反应。生成的颜色较稳定，在4h内无明显变化。

线。

2．测定样品的含糖量取4支试管按下表操作。

编号

1234

试剂（ml）

样