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免疫学和免疫学检验：免疫原和抗血清的制备

抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素，也是整个免疫反应的基本

条件。抗原的纯化是制备特异性抗的先决条件，制得的抗体可用于纯化抗原和

检测抗原。抗体有单克隆和多克隆两类。

抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素，也是整个免疫反应的

基本条件。抗原的纯化是制备特异性抗的先决条件，制得的抗体可用于纯化抗

原和检测抗原。抗体有单克隆和多克隆两类。单克隆抗体用杂交瘤技术制备

（详见第十一章），多克隆抗体存在于免疫动物抗血清中。近年来又出现了基

因工程抗体（单链抗体）。本章仅叙述抗原纯化和多克隆抗血清制备技术。第

一节免疫原的制备免疫原是诱导机体产生抗体、并能与抗体发生反应的物

质。能否制得合格的抗体由许多因素决定，而能否制备合格的免疫原则是其前

提条件。而且作为诊断试剂的抗原也必须是单一特异性的，即纯化的抗原。自

然众多的物质皆可成为免疫原，但绝少是单一成分（除非是合成的基因工程制

备的），所以必须将某个抗原从复杂的组分中提取出单一的成分。下面介绍有

代表性的免疫原制备方法。一、颗粒性抗原的制备颗粒性抗原主要是指细胞

抗原或细菌抗原。最常用的细胞抗原为制备溶血素用的绵羊红细胞。这种抗原

制备比较简单，采集新鲜绵羊红细胞，以无菌盐水洗涤3次（每次离心

2000r/min10min），最后配成106/ml浓度的细胞悬液，即可应用。细菌抗原多

用液体或固体培养物经集菌后处理。H抗原用有动力的菌株，菌液用0.3％～

0.5％甲醛处理，而O抗原则需要100℃加温2～2.5h后应用。Vi抗原则应在杀

菌后再加0.5％～1％氯化钙溶液。有时虫卵也可做成抗原，如日本血吸虫卵抗

原可制成悬液供免疫用。有些细胞膜成分，如组织细胞膜、血细胞膜经打碎后

亦可制成颗粒抗原。颗粒抗原悬液呈乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少使用

佐剂作皮内注射。二、可溶性抗原的制备和纯化蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、

细菌毒素、酶、补体等皆为良好的可溶抗原。但因这些蛋白质多为复杂的蛋白

组分，免疫前需进行纯化。蛋白质纯化方法在生物化学技术中已有详述，本章

主要介绍免疫化学纯化方法。（一）组织和细胞粗抗原的制备免疫原多来源

于只类及动物的组织或细胞，这些材料在取得可溶性蛋白质之前，必须先进行

处理，以适合于进一步纯化。1．组织细胞抗原的制备所用组织必须是新鲜的

或低温(＜－40℃）保存的。器官或组织得到后立即去除表面的包膜或结缔组织

以及一些大血管。如有条件，脏器应进行灌注，除去血管内残留的血液。处理

好的组织用0.05/NaN3生理盐水洗去血迹及污染物。将洗净的组织剪成小块，

进行粉碎。粉碎的方法有两类：①高速组捣碎机法。操作时，将组织加盐水

（约1/2）装入捣碎机筒内，用高速（约1000r/min）间断进行，每次30～

60s，时间过长会产热。②研磨法。可用玻璃匀浆器或乳钵研磨。玻璃匀浆器是

由一内壁经过磨砂的玻璃管和一根一端为圆柱状（表面亦经磨砂）的磨杆组

成，主要经过旋转、压挤将组织粉粹。研磨法可用于韧性较大听组织，如皮

肤、空腔器官等。为了更有效地磨碎组织，有时在研磨时加入淘洗过的海砂。

组织匀浆通过2000～3000r/min离心10min后分成两个部分：沉淀物含有大量

的组织细胞和碎片；上清液作为提取可溶性抗原的材料，提取前还要通过

1000～2000r/min20～30min的高速离心，以除去微小的细胞碎片，此时上清液

应澄清。2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备制备抗原用的细胞包括正

常细胞、病理细胞（如肿瘤细胞）或传代细胞。组织细胞的制备一般通过上述

机械破碎后取得。或通过酶消化，所用的酶大多为胃蛋白酶或胰酶。通过酶解

将细胞间质蛋白消化，获得游离的单个细胞。细胞抗原一般分为三个组分：膜

蛋白抗原、细胞浆抗原（主要为细胞器）和细胞核及核膜抗原。三种抗原的制

备皆需将细胞破碎，方法有如下几种。（1）反复冻融法：将待破碎的细胞

（有时为整块组织）置－20冰箱内冻结，然后缓慢地融化。如此反复2次，大

部分组织细胞及细胞内的颗粒可被融破。（2）冷热交替法：在细菌或病毒中

提取蛋白质及核酸时可用此法。操作时，将材料投入沸水浴中，90℃左右维持

数分钟，立即置于冰浴中使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。（3）超声破

碎法：对微生物和组织细胞多用此法。处理效果与样品浓度和使用频率有关。

一般组织细胞皆易破碎，而细菌，