洋葱、大蒜病毒鉴定技术规程.docx

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洋葱、大蒜病毒鉴定技术规程

1范围

本文件规定了内蒙古洋葱、大蒜病毒鉴定技术的术语和定义，检测对象，取样部位，抽样，鉴定方法和判定规则。

本文件适用于内蒙古洋葱、大蒜的病毒鉴定。环境相似的洋葱、大蒜产区可参照执行。2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

洋葱Alliumcepa

又称葱头、圆葱，百合科、葱属两年生园艺作物，以地下鳞茎为食用部位，具有强烈香气。

3.2

大蒜Alliumsativum

百合科、葱属多年生园艺作物，繁殖殖方式为营养繁殖。

3.3

反转录-聚合酶链式反应Reversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)

提取洋葱、大蒜检材的总RNA，以其中的mRNA为模板，利用反转录酶反转录成cDNA，再以cDNA为模板进行聚合酶链式反应。

4检测对象

4.1洋葱主要病毒

a）洋葱黄矮病毒（onionyellowdwarfvirus，OYDV）

b）韭葱黄条病毒（leekyellowstripevirus，LYSV）

c）胡葱黄条病毒（shallotyellowstripevirus，SYSV）

d)大蒜普通潜隐病毒（garliccommonlatentvirus，GCLV）f)鸢尾黄斑病毒(irisyellowspottospovirus，IYSV)

g)番茄斑萎病毒(tomatospottedwilttospovirus，TSWV)h)黄瓜花叶病毒（cucumbermosaicvirus，CMV）

4.2大蒜主要病毒

a）洋葱黄矮病毒（onionyellowdwarfvirus，OYDV）

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b）韭葱黄条病毒（leekyellowstripevirus，LYSV）

c）胡葱黄条病毒（shallotyellowstripevirus，SYSV）

d)大蒜普通潜隐病毒（garliccommonlatentvirus，GCLV）e）葱潜隐病毒（shallotlatentvirus，ShLV）

f）鸢尾黄斑病毒(irisyellowspottospovirus，IYSV)

g）番茄斑萎病毒(tomatospottedwilttospovirus，TSWV)

h）大蒜黄花叶相关病毒(garlicyellowmosaic-associatedvirus，GYMaV）

i）黄瓜花叶病毒（cucumbermosaicvirus，CMV）j）大蒜病毒A（garlicvirusA，GarV-A）

k）大蒜病毒B（garlicvirusB，GarV-B）l）大蒜病毒C（garlicvirusC，GarV-C）m）大蒜病毒D（garlicvirusD，GarV-D）n）大蒜病毒E（garlicvirusE，GarV-E）o）大蒜病毒X（garlicvirusX，GarV-X）p）葱病毒X(shallotvirusX，ShV-X)

q）紫云英矮缩病毒（milkvetchdwarfvirus，MDV）

5取样

5.1取样方法

5.1.1五点取样法

对于洋葱、大蒜无症状的种植区或面积较大的种植区采用5点取样法随机抽取。1000株以内抽检10株（含1000株）；1000株～10000株（含10000株）,首个1000株抽检10株之后每增加1000株增检5株，不足1000株按1000株计；超过10000株，第1000～10000株按上述方法抽样，之后每增加1000株增检20株，不足1000株按1000株计。

5.1.2根据症状观测取样

感染病毒病的洋葱、大蒜极易表现出矮化、扭曲、黄化、褪绿以及坏死斑等症状。根据在洋葱、大蒜上观测的各症状表现可进行有效取样。

5.2取样部位

洋葱、大蒜生长前期取幼嫩叶片放置自封袋，4℃保存不超过24h或液氮预冷后立即放置于-80℃长期保存备用；生长后期以娇嫩叶片及鳞茎为取样部位，较嫩叶片放置自封袋，立即进行液氮预冷并放置-80℃长期保存备用，鳞茎放置干燥、通风、无污染的收集盒中存放。

6反转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR法)鉴定详见附录A。

7判定规则

RT-PCR检测呈阳性反应的判定为携带病毒。脱毒洋葱、大蒜带毒率为0。

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附录A（规范性）

反转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR法)鉴定

A.1试剂盒

A.1.1植物DNA、RNA提取试剂盒：选择适合提取含有多糖多酚材料的DNA、RNA试剂盒。

B.1.2反