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ELISA试剂盒批发免疫标记技术

ELISA试剂盒批发酶标抗体或抗抗体（抗免疫球蛋白）结合物可采用戊

二醛法或过碘酸盐氧化法制备。郭春祥建立的辣根过氧化物酶（HRP）标记抗

体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制

备。现将操作方法介绍如下：

 （一）结合物的标记将5mgHRP溶于05ml蒸馏水中，加入新配制的

006mol/LNaIO4水溶液05ml，混匀，置冰箱30min，取出加入016mol/L乙醇

水溶液05ml，室温放置30min后，加入含5mg纯化抗体的水溶液（或PBS）

1ml，混匀并装透析袋，以005mol/L、pH值95碳酸盐缓冲液缓慢搅拌透析6h

（或过一夜）使之结合，然后吸出加NaBH4溶液（5mg/ml）02ml，置冰箱

2h。将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵，冰箱放置30min，离心，将

所得沉淀物溶于少许002mol/L、pH值74PBS中，并对之透析过一夜。次日再

离心除去不溶物，即得酶抗体结合物。用002mol/L、pH值74PBS加至5ml，

进行测定后，冷冻干燥或低温保存。

 （二）结合物中HRP与抗体量的测定酶标结合物于751型分光光度计上

分别用280及403nm波长测定其光密度（OD），并计算出OD403与OD280之

比值以及HRP与抗体的mol/L比。

 结合物中HRP浓度（mg/ml）=OD403乘以04

 结合物中IgG浓度（mg/ml）=（OD280-OD403乘以03）乘以062

 酶/抗体mol/L比=HRP浓度IgG浓度乘以4

 （三）结合物稀释度的测定

 用酶结合物中抗体相应的抗原直接包被聚苯乙烯反应板，采用ELISA直接法

测定酶结合物效价。通常本法制备的酶结合物作1∶10000稀释时，其OD403

仍在01以上。

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