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附件3

HIV-2核酸检测

1范围

本附件规定了HIV-2核酸检测的意义、实验室要求、检测方法、结果判定及质量控制

的要求，适用于具有核酸检测能力的实验室。

2检测的意义

2.1HIV-2感染诊断

当疑似HIV-2感染、HIV-2抗体确证检测结果为不确定，或者需要区分HIV-1和HIV-2

感染，需要判定是否为HIV-1/HIV-2双重感染时，可以检测HIV-2核酸进行诊断。

HIV-2前病毒DNA（以下简称DNA）、RNA和总核酸（DNA/RNA）检测结果均可用于HIV-

2感染诊断。HIV-2感染者和艾滋病病人血浆中HIV-2RNA检出率低，病毒载量水平也低，

例如，一个西非的队列研究结果显示，在未接受过抗病毒治疗的HIV-2感染者和艾滋病病

人中，血浆HIV-2病毒载量未检出（＜10cps/mL）的占46.5%，病毒载量为10-1cps/mL、

1-10cps/mL和＞10cps/mL的分别占35.8%、11.7%和6.0%。因此，建议优先选择检测

HIV-2DNA或总核酸。HIV-2核酸阴性或低于检测限时，不能排除HIV-2感染。

2.2抗病毒治疗疗效监测

适用于已知HIV-2感染者和艾滋病病人。但因HIV-2RNA病毒载量水平低，应用价值

有限。

3实验室要求

同HIV-1核酸检测和HIV-1基因型耐药检测，功能分区根据所用方法和设备的需要而

定。

4检测方法

HIV-2核酸检测包括DNA定性、定量，RNA定性、定量（病毒载量）及总核酸检测。目

前我国还没有HIV-2核酸检测试剂盒获得国家药品监督管理局注册。今后如有试剂盒获批，

使用方法以试剂盒说明书为准。以下介绍一些实验室自建方法，实际工作中可以根据具体

需求选用、调整。

4.1样本

外周血单个核细胞（PBMC）、淋巴细胞富集液和全血等样本可用于HIV-2DNA或总核

酸检测，血浆样本可用于HIV-2RNA检测。

4.2核酸提取

根据检测目的，选用不同的商品化试剂盒提取核酸，如总核酸提取试剂盒、DNA提取试

剂盒、RNA提取试剂盒。

4.3核酸检测

常用的HIV-2核酸检测方法有2类，实时荧光PCR和套式PCR。承担美国HIV-2核酸检

测的两家实验室（美国纽约州卫生局Wadsworth中心和华盛顿大学）均使用实时荧光PCR，

HIV-2特异性靶标均为长末端重复序列（LTR）的保守区但位置不同；法国ANRS-CO5HIV-2

和ANRS-AC11定量工作组（以下简称ANRS项目组，其中ANRS为国家艾滋病和病毒性肝炎

研究所）也使用实时荧光PCR，但HIV-2特异性靶标为LTR和gag基因保守区。以上方法均

可覆盖HIV-2的A、B流行亚型。国内主要利用套式PCR扩增HIV-2LTR和gag等基因的保

守区片段，PCR产物经测序、序列比对后进行HIV-2感染诊断。

4.3.1实时荧光PCR

4.3.1.1美国纽约州卫生局Wadsworth中心建立的方法用于血浆中HIV-2RNA的定性、定

量检测。血浆样本经RNA提取、逆转录后进行双重实时荧光PCR检测，检测靶标为HIV-2

LTR保守区并设内对照。HIV-2LTR目的片段的长度为68bp，引物和TaqMan探针序列见表

1。

4.3.1.2华盛顿大学基于雅培（Abbott）m20平台建立的方法用于血浆中HIV-2RNA病毒载

量、PBMC中HIV-2总核酸检测。采用双重实时荧光PCR，检测靶标为HIV-2LTR保守区并

设内对照。HIV-2引物和探针序列见表1。

4.3.1.3法国ANRS项目组建立的方法用于血浆中RNA病毒载量检测及外周血单个核细胞

（PBMC）、淋巴细胞富集液或全血中的DNA定量检测。采用三重实时荧光PCR，检测靶标

为HIV-2LTR及gag基因的保守区及内对照。HIV-2的引物和探针序列见表

表1HIV-2实时荧光PCR引物和探针序列

来源及名称序列（5’-3’）

美国纽约州卫生局Wadsworth中心，靶标为LTR保守区