EGFP在肿瘤细胞中的表达调控(基因工程综合性实验).pdfVIP

西南大学

本科实验教学改革行动计划项目

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综合性、设计性实验项目建设

项目名称：EGFP在肿瘤细胞中的表达分析

--基因工程课程综合性实验项目

项目负责人：杨应斌

负责人所在部门：生命科学学院

填表日期：2010年6月16日

EGFP在肿瘤细胞中的表达分析

引言

利用肿瘤组织特异性启动子调控自杀基因在肿瘤组织的靶向表达，是肿瘤基

因治疗研究中的一种策略。目前常用的肿瘤组织特异性启动子有：前列腺特异性

hTERT

抗原（PSA）启动子、癌胚抗原（CEA）启动子、人类端粒酶逆转录酶（）

启动子等。其中hTERT在85%以上的不同组织起源的各种类型的恶性肿瘤中，

都可以检测到较高水平的表达，而在正常哺乳动物体细胞中，除生殖细胞等少数

几种细胞可检测到活性以外，其它组织细胞均为阴性。由于hTERT启动子和其

它启动子相比，具有广谱（在大多数肿瘤细胞中有活性）、转录活性高、靶向性

好等优点，因而被认为是肿瘤基因治疗领域里较有潜在应用价值的启动子。现已

有使用hTERT启动子成功对骨肉瘤、结肠癌、肝细胞肝癌等恶性肿瘤进行靶向

基因治疗的报道。

人类骨髓干细胞不具有端粒酶活性已经被报道，然而BurnsJS的研究发现，

长时间在体外培养的干细胞可能发生癌变，其原因是其开始表达端粒酶。而肿瘤

hTERT

细胞之所以能够无限增殖，也与其有比正常细胞活跃的端粒酶有关。基因

hTERThTERT

的转录机制严格控制着端粒酶的活性的表达，而基因的转录被基

hTERT

因启动子调控，基因启动子是一种在肿瘤细胞中特异启动的启动子，因此，

我们构思可以利用hTERT基因启动子，在其下游接入自杀基因，并将其克隆入

慢病毒载体中，再借助慢病毒将此融合基因导入骨髓干细胞中，筛选出含有由

hTERT基因启动子控制自杀基因的供体骨髓干细胞，当这种移植的骨髓干细胞在

植入体内后有形成肿瘤细胞的趋势时，就可以通过自杀基因的表达使用前体药物

对有瘤变趋势的骨髓干细胞进行杀灭，这样既不会对受体产生副作用，又可以由

此解决骨髓干细胞移植的安全性问题。因此构建一种靶向表达自杀基因的载体，

这种载体转染骨髓干细胞后能很容易筛选，并且被转染的骨髓干细胞能稳定表达

自杀基因且不会发生丢失，这将成为骨髓干细胞移植瘤变研究中关键且必要的步

骤。

然而，在本研究的前期实验中，我们发现野生型hTERT启动子如其他已知

肿瘤组织特异性启动子一样，仍然存在着肿瘤组织转录活性与靶向性较差的问

题，而不能保证将导入体内的自杀基因限制在肿瘤细胞中特异性地表达。因此，

如何利用肿瘤细胞中特异性的表达上调因子结合元件对hTERT启动子进行顺式

修饰，以提高hTERT启动子在骨髓瘤变细胞中的转录活性是本节研究所关注的

重点。

c-Myc

据研究表明，基因的大量扩增是促使癌细胞无限增殖的重要原因，转

hTERT

录因子c-Myc（或c-Myc与其它转录因子形成的二聚体复合物）与启动子

E-boxhTERT

上的结合后可以启动