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小鼠β-神经生长因子（NGF-b）试剂盒技术参数

小鼠beta;-神经生长因子（NGF-b）试剂盒实验原理

 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪雄烯酮(ADT)水平。用纯化的猪雄

烯酮(ADT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雄

烯酮(ADT)，再与HRP标记的雄烯酮(ADT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗

体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化

成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雄烯酮

(ADT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲

线计算样品中猪雄烯酮(ADT)浓度。

 标本要求

 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实

验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活

性。

 操作步骤

 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小

试管中进行稀释。

 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相

同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50mu;l，待测样

品孔中先加样品稀释液40mu;l，然后再加待测样品10mu;l（样品最终稀释

度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后

弃去，如此重复5次，拍干。

 6.加酶：每孔加入酶标试剂50mu;l，空白孔除外。

 7.温育：操作同3。

 8.洗涤：操作同5。

 9.显色：每孔先加入显色剂A50mu;l，再加入显色剂B50mu;l，轻轻震荡

混匀，37℃避光显色10分钟.

 10.终止：每孔加终止液50mu;l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测

定应在加终止液后15分钟以内进行。

 小鼠beta;-神经生长因子（NGF-b）试剂盒计算

 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根

据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的

浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程

式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

 注意事项

 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被

板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影

响结果。

 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一

次加样时间zui好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

 4．请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过

高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍

数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（乘以n乘以5）。

 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

 6．底物请避光保存。

 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

 9．本试剂不同批号组分不得混用。

 小鼠beta;-神经生长因子（NGF-b）试剂盒保存条件及有效期

 1．试剂盒保存：2-8℃。

 2．有效期：6个月

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