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犬内皮素1（ET-1）酶联免疫分析试剂盒使用方法

犬内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心

法测定标本中犬内皮素1(ET-1)水平。用纯化的犬内皮素1(ET-1)抗体包被微孔

板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内皮素1(ET-1)，再与HRP

标记的内皮素1(ET-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗

涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用

下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮素1(ET-1)呈正相关。用酶

标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中犬内皮

素1(ET-1)浓度。试剂盒组成

 标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽

快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻

融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活

性。犬内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂

盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相

同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50mu;l，待测样

品孔中先加样品稀释液40mu;l，然后再加待测样品10mu;l（样品zui终稀

释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤

液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每

孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶

标试剂50mu;l，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显

色：每孔先加入显色剂A50mu;l，再加入显色剂B50mu;l，轻轻震荡混匀，

37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50mu;l，终止反应（此时蓝色

立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD

值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为横坐

标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲

线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准

曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘

以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应

在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入

密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助

溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确

性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使

用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质

含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一

定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（乘以n乘以5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格

按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，

洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。

犬内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-

8℃。2．有效期：6个月

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