人β防御素-1ELISA检测试剂盒使用方法.pdfVIP

人β防御素-1ELISA检测试剂盒使用方法

人beta;防御素-1ELISA检测试剂盒试验原理：beta;-defensins-1试剂盒

是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已beta;-defensins-1浓度的标准

品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将beta;-defensins-1和生

物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和

洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。颜色的深浅和样品中beta;-defensins-1的浓度呈比例关系。

 自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

振荡器及磁力搅拌器等。

 安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用

水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何

成份。

 人beta;防御素-1ELISA检测试剂盒

 操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标

准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，

以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质

前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避

免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混

匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接

放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏

感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取

OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照

说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

 人beta;防御素-1ELISA检测试剂盒

 样品收集、处理及保存方法血清操作过程中避免任何细胞刺激。使用不

含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000乘以g离心10分钟将血清和红细

胞迅速小心地分离。血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000

乘以g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液1000乘以g离心10分钟去除颗粒

和聚合物。组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。1000乘以g离心10分

钟，取上清液保存如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，

避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检

测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确

保样品均匀地充分解冻。

 人beta;防御素-1ELISA检测试剂盒操作步骤使用前，将所有试剂充分混

匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的

误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和

空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复

孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标

准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素

标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每

孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。

如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，

轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30

秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤

次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分

钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定

结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。

 局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结

果。

 试剂盒性能1.灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。

样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因

子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

 人beta;防御素-1ELISA检测试