大鼠组织型纤溶酶原激活剂elisa检测试剂盒的实验操作程序总结.pdf

大鼠组织型纤溶酶原激活剂elisa检测试剂盒的实验操作

程序总结

大鼠组织型纤溶酶原激活剂elisa检测试剂盒

 实验开始前，各试剂均应平衡至室(试剂不能直接在37℃溶解)；试剂或样

品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品

浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合ELISA试剂盒的检测

范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

 1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液

100mu;l，余孔分别加标准品或待测样品100mu;l，注意不要有气泡，加样

将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或

覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准

品溶液。

 2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100mu;l(在使用

前一小时内配制)，酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

 3.温育60分钟后，弃去孔大鼠组织型纤溶酶原激活剂elisa检测试剂盒内液

体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400mu;l/每孔，甩干(也可轻

拍将孔内液体拍干)。

 4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100mu;l，酶标板加上覆膜37

℃反应60分钟。

 5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，

350mu;l/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

 6.依序每孔加底物溶液90mu;l，酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟

内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明

显，即可终止)。

 7.依序每孔加终止溶液50mu;l，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的

加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-

PA)ELISA试剂盒为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入

终止液。

 8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即

进行检测。

 大鼠组织型纤溶酶原激活剂elisa检测试剂盒的实验操作程序总结

 1.准备试剂，样品和标准品

 2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

 3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

 4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟

 5.加入终止液

 6.15分钟之内度OD值

 7.计算

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