肠道微生物移植工艺的制作流程.pdf

本技术介绍了一种肠道微生物移植工艺，包括如下步骤：1)粪便样本采集；2)肠道微生物提取；3)肠道

微生物制剂制备，包括肠道微生物灌肠液、肠道微生物胶囊、肠道微生物冻干胶囊；4)肠道微生物移

植：通过灌肠或口服方式将步骤3)得到肠道微生物制剂进行移植。用于治疗肠道微生物失调导致肠

道疾病，以及由于肠道微生物失调导致免疫系统和神经系统疾病。

技技术术要要求求

1.一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：包括如下步骤：

1)粪便样本采集：

①选取合格捐赠者捐赠粪便样本，用一次性食品盒及朔料袋包装，在一小时内送到实验室，称重；

②按1：(3-7)重量比例加入生理盐水，匀浆，0.2-5.0μm过滤，去掉残渣；

③对滤液进行检测，得到合格滤液；

2)肠道微生物提取：

将合格滤液装入离心管，1000-2000rpm离心10-20分钟除去沉淀，上清液装入新离心管中，3000-

4000rpm离心5-10分钟，弃去上清，沉淀物用生理盐水洗涤，再次3000-4000rpm离心5-10分钟，反复三

次，最后得到液体用20-60μm滤膜过滤，除去可能寄生虫卵，得到沉淀，备用；

3)肠道微生物制剂制备，包括肠道微生物灌肠液、肠道微生物胶囊、肠道微生物冻干胶囊：

①肠道微生物灌肠液：将步骤2)最后得到沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:50体积比混合，装入

瓶中，置于-80℃冰柜保存备用；

②肠道微生物胶囊：将步骤2)最后得到沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1体积比混合，用移液器

将混合液注入肠溶胶囊中，封装，将肠道微生物胶囊装入药瓶，药瓶中先放入1/4-1/3体积干冰，冻结

后，放入脱氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；

或者将肠道微生物胶囊先放置在速冻板上，冻结后，把胶囊装入药瓶，放入脱氧干燥保护剂，置于-

80℃冰柜保存备用；所述速冻板是表面是纳米银离子表面处理导热高密度航空合金，平时放置

在-80℃冰柜内，使用时取出，在其下面垫上冰袋；

③肠道微生物冻干胶囊：将步骤2)最后得到沉淀、冻存剂和生理盐水，按照1:1:1体积比混合，放置

到冻干机中冻干，将肠道微生物冻干粉装入肠溶胶囊，封装，将肠道微生物冻干胶囊装入药瓶，放入脱

氧干燥保护剂，置于-80℃冰柜保存备用；

所述冻存剂是将甘油、脱脂牛奶、乙酰化二淀粉磷酸酯，按照(9-11)mL:(88-92)mL:(0.01-0.02)g比例

混合均匀得到；

4)肠道微生物移植：通过灌肠或口服方式将步骤3)得到肠道微生物制剂进行移植。

2.根据权利要求1所述一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：步骤1)所述合格捐赠者，是选择年龄

在18-30岁之间，无不良嗜好，不吸烟、不嗜酒，饮食规律，睡眠规律，睡眠质量好无失眠；身体匀

称，BMI值小于24，大于20，半年内无使用药物史，半年内无腹泻便秘等消化道症状健康志愿者，每

半年要抽血检测抗-HIV、HBsAg、HBV和梅毒，或者每半年到血站无偿献血一次，同时将血站献血报

告单提交实验室存档；每月检测一次大便艰难梭状芽孢杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和寄生虫，每月检

测一次大便钙卫蛋白。

3.根据权利要求1所述一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：步骤1)所述实验室，用房为独立单

元，不得携入或操作强毒株或其他病毒、致病菌，生产前，对生产区进行消毒；工作人员必须经过专业

培训，身体健康，并服注射过乙肝疫苗，每年生产前进行体检，传染性肝炎、痢疾、活动性肺结核患者

不得进入实验室生产区，腹泻期间不得参与生产活动。

4.根据权利要求1所述一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：步骤1)所述匀浆，是指中速匀浆5-10

分钟。

5.根据权利要求1所述一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：步骤1)所述合格滤液，是指无明显沉

淀，无异常颜色滤液。

6.根据权利要求1所述一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：步骤1)所述肠道微生物灌肠液，每瓶

装入量是200mL。

7.根据权利要求1所述一种肠道微生物移植工艺，其特征在于：步骤3)所述冻存剂是将甘油、脱脂牛

奶、乙酰化二淀粉磷酸酯，是按照10mL:90mL:0.01g比例混合均匀得到。

技技术术说说明明书书

一种肠道微生物移植工艺

【技术领域】

本技术涉及微生物医药技术领域，具体涉及一种肠道微生物移植工艺。

【背景