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碱性蛋白与酸性蛋白

碱性蛋白与酸性蛋白

的显示

的显示

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目的要求

目的要求

l1.学会制血涂片

l2.了解碱性蛋白与酸性蛋白的显示方法的

原理及操作步骤

l3.了解碱性蛋白与酸性蛋白的分布

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实验原理

实验原理

l以酸性氨基酸成分为主的蛋白质为酸性

蛋白;以碱性氨基酸成分为主的蛋白质为

碱性蛋白。细胞核内有组蛋白〔碱性蛋

白〕及少量酸性蛋白，细胞质中主要有

酸性蛋白，标本经三氯醋酸处理抽提掉

核酸后，用不同pH值的快绿染液分别染

色，使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质

显示出来。

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实验用品

实验用品

l1.器材：水浴锅，染色缸，载玻片，注射器等

l2.试剂：①70％乙醇溶液②5

③0.2％快绿④0.005％Na2CO3溶液

l⑤1.75mol/LHCL:盐0.109ml〔比重

蒸馏水至100ml〔假设盐酸比重1.16那么取0.13ml

〕

l⑥酸性蛋白染色液〔pH2.2〕：0.2％快绿和等量

1.75mol/LHCL溶液混合而成

l⑦碱性蛋白染色液〔pH8.0〕：0.2％快绿和等量

0.005％Na2CO3溶液混合而成。

l3.材料：蟾蜍血涂片。.

蟾蜍取血

蟾蜍取血

l常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组

织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体

和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头

部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及

一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直

插入此凹陷约l～2mm，随即将针尖转向头侧

插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转

向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其

四肢松软，呼吸消失为止。

l以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡

盘中，剪开胸腔，翻开心包。小心将心脏剪一

小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推

片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。

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l1取一滴血滴于玻片的一端

l2以另一玻片以30-45度的角度匀速向前推片，中间不

要停顿，不可反复涂片，动作要快以防止血液凝固。

l3自然枯燥后固定。

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方法与步骤

方法与步骤

l1.新鲜血涂片自然枯燥10min，入70%乙醇溶液中

固定10min。

l2.取出晾干入70－90℃5％三氯醋酸溶液15－

20min。

l3.在5％三氯醋酸溶液漂洗后，蒸馏水洗3次〔

每次5min〕。

l4.分别插入染色液中染色〔酸性蛋白染色液染色

15min，碱性蛋白染色液染色45min〕

l5.取出，蒸馏水洗。

l6.风干，二甲苯透明2min，树胶封片。

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观察结果

观察结果

l酸性蛋白染色时，蟾蜍红细胞质