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碱性蛋白与酸性蛋白
碱性蛋白与酸性蛋白
的显示
的显示
.
目的要求
目的要求
l1.学会制血涂片
l2.了解碱性蛋白与酸性蛋白的显示方法的
原理及操作步骤
l3.了解碱性蛋白与酸性蛋白的分布
.
实验原理
实验原理
l以酸性氨基酸成分为主的蛋白质为酸性
蛋白;以碱性氨基酸成分为主的蛋白质为
碱性蛋白。细胞核内有组蛋白〔碱性蛋
白〕及少量酸性蛋白,细胞质中主要有
酸性蛋白,标本经三氯醋酸处理抽提掉
核酸后,用不同pH值的快绿染液分别染
色,使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质
显示出来。
.
实验用品
实验用品
l1.器材:水浴锅,染色缸,载玻片,注射器等
l2.试剂:①70%乙醇溶液②5
③0.2%快绿④0.005%Na2CO3溶液
l⑤1.75mol/LHCL:盐0.109ml〔比重
蒸馏水至100ml〔假设盐酸比重1.16那么取0.13ml
〕
l⑥酸性蛋白染色液〔pH2.2〕:0.2%快绿和等量
1.75mol/LHCL溶液混合而成
l⑦碱性蛋白染色液〔pH8.0〕:0.2%快绿和等量
0.005%Na2CO3溶液混合而成。
l3.材料:蟾蜍血涂片。.
蟾蜍取血
蟾蜍取血
l常用捣髓法处死蟾蜍,即用解剖针捣毁其脑组
织和脊髓。具体方法是,左手握住蟾蜍的身体
和四肢,使其腹部贴着掌心,食指压住蟾蜍头
部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及
一凹陷(即枕骨大孔所在处),右手持解剖针直
插入此凹陷约l~2mm,随即将针尖转向头侧
插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转
向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其
四肢松软,呼吸消失为止。
l以破坏脊髓法处死蟾蜍,将其腹面向上放人蜡
盘中,剪开胸腔,翻开心包。小心将心脏剪一
小口,取心脏血一滴滴在干净载玻片一端,推
片,按此法制备二张血涂片,室温晾干。
.
l1取一滴血滴于玻片的一端
l2以另一玻片以30-45度的角度匀速向前推片,中间不
要停顿,不可反复涂片,动作要快以防止血液凝固。
l3自然枯燥后固定。
.
方法与步骤
方法与步骤
l1.新鲜血涂片自然枯燥10min,入70%乙醇溶液中
固定10min。
l2.取出晾干入70-90℃5%三氯醋酸溶液15-
20min。
l3.在5%三氯醋酸溶液漂洗后,蒸馏水洗3次〔
每次5min〕。
l4.分别插入染色液中染色〔酸性蛋白染色液染色
15min,碱性蛋白染色液染色45min〕
l5.取出,蒸馏水洗。
l6.风干,二甲苯透明2min,树胶封片。
.
观察结果
观察结果
l酸性蛋白染色时,蟾蜍红细胞质
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