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流式细胞术的根本原理
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流式细胞术〔flowcytometer，FCM〕：
利用流式细胞仪对处于快速直线流动
状态中的单列细胞或生物颗粒进行逐
个、多参数、快速的定性、定量分析
或分选的技术。
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流式细胞仪：是集现代物理电子技术、激光
技术、光电测量技术、计算机技术以及细
胞荧光化学技术、单克隆抗体技术于一体
的先进科学技术设备
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流式细胞仪分为四局部：
1〕流动室与液流系统
2〕光源与光学系统
3〕信号收集、转换与分析系统
4〕细胞分选系统
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1〕流动室与液流系统
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2〕光源与光学系统
激光〔单色性、单向性〕
前向散射〔FSC〕
侧向散射〔SSC〕
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激发波长
发射波长
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3〕信号收集、转换与分析系统
•激发波长经过滤光片别离不同波长的光
号分别到达不同的光电倍增管(PMT)，PMT
将光信号转换成电信号，电信号输入到放
大器放大。
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•放大器分两类：线性放大和对数放大。
•细胞DNA含量、RNA含量、总蛋白质含量
等的测量一般选用线性放大测量。
•细胞膜外表抗原等的检测，由于外表抗原的
分布有时要相差几十倍，甚至几万倍，故取
对数放大。
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光谱重叠与荧光补偿
•实际中激发波长是正态或偏态曲线，荧光
素之间的波谱常有重叠，故流式细胞仪参
加了电子补偿系统，去除因光谱重叠而进
入其他荧光探测器的荧光信号，即荧光补偿。
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流式细胞术的对照设置
阴性对照：调节荧光探测器适宜的放大倍
数，将仪器归零，确定样本的根底荧光域
值
阳性对照：检测抗体是否有问题或确定实
验方法的稳定性、准确性
空白对照：不标记，自发荧光
PS补偿对照：多色分析样本时为荧光光谱
重叠进行的的补偿调节
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4〕细胞分选系统
•根据某参数决定细胞液滴是否被分选，然
后由充电电路对其充电，带电液滴通过静
电场发生偏转而别离
488nmlaser
FALSSensor
Fluorescencedetector
ChargedPlates-+
Singlecellssorted
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intotesttubes
流式细胞术流程
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应用
•细胞膜：流动性、膜电位、膜通透性
•细胞内离子浓度：H+、Na+、K+和Ca2+
•细胞周期：全周期分析、S期分
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