小鼠颗粒体蛋白(GRN)elisa定量检测试剂盒检测原理和样本采集.pdf

小鼠颗粒体蛋白（GRN）elisa定量检测试剂盒检测原理

和样本采集

小鼠颗粒体蛋白（GRN）elisa定量检测试剂盒

 检测原理:

 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗颗粒体蛋白(GRN)抗体包被于酶标

板上，实验时样品或标准品中的颗粒体蛋白(GRN)会与包被抗体结合，游离的

成分被洗去。依次加入生物素化的抗颗粒体蛋白(GRN)抗体和辣根过氧化物酶

标记的亲和素。抗颗粒体蛋白(GRN)抗体与结合在包被抗体上的颗粒体蛋白

(GRN)结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗

去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终

止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，颗粒体蛋白(GRN)浓度

与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中颗粒体蛋白(GRN)的

浓度。

 小鼠颗粒体蛋白（GRN）elisa定量检测试剂盒

 样品收集:

 1.血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后1000乘以g离心20分

钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试

管。

 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内1000乘以g

离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。

 3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆

中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应

体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的

PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入

蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织

细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液5000乘以

g离心5~10分钟，取上清检测。

 4.细胞培养上清：取细胞培养上清1000乘以g离心20分钟，除去杂质及

细胞碎片。取上清检测。

 5.其它生物样品：1000乘以g离心20分钟，取上清即可检测具体处理方法

可参考：

 6.样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

 7.样品收集后若在1周内进行检测的可保存4℃，若不能及时检测，请按

一次使用量分装，冻存-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避

免反复冻融。

 8.如果您的样品中检测物浓度高于标准品zui高值，请根据实际情况，做适

当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。

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