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DNS法测复原糖含量
——3,5-二硝基水杨酸法
.
目
的
•掌握复原糖和总糖的测定原
理，学习用比色法测定复原
糖的方法
.
原理
•
•1.复原糖的测定是糖定量测定的根本方法。复原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是复原糖，双糖和多糖不一定是复原糖
•2.在NaOH和丙三醇存在下，DNS与复原糖共热后被复原生成氨基化合物，在过量的碱性溶液中此化合物呈桔红色，在一定范围内，复原糖的量与桔红色物质颜色的深
浅成正比关系，利用分光光度计，在550nm波长下测定吸光度，查对标准曲线并计算，便可求出样品中复原糖和总糖的含量
•3.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需参加一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9
•
.
•反响化学方程式——
黄色桔红色
.
实验材料、主要仪器和试剂
•1、试剂
•〔1〕1mg/mL葡萄糖标准液
•准确称取枯燥恒重的葡萄糖100mg，加少
量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL
•〔2〕3,5-二硝基水杨酸〔DNS〕试剂
•将6.3gDNS和262mL2Mol/LNaOH溶液，
加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，
再5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后
加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
.
〔3〕碘-碘化钾溶液
〔4〕6mol/lNaOH
〔5〕0.1%酚酞指示剂
〔6〕6mol/lHCl溶液
2、材料淀粉
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电子
万用炉，试管假设干
.
•一、制作葡萄糖标曲线实验步骤
•取10支试管，按下表参加试剂
试剂0123456789
葡萄糖标00.20.40.50.60.70.81.01.21.4
准液/ml
蒸馏水/ml2.01.81.61.51.41.31.21.00.80.6
DNS/ml1.51.51.51.51.51.51.51.51.51.5
葡萄糖含00.20.40.50.60.70.81.01.21.4
量/mg
混合均匀→沸水中加热5min取出→冷水冷却至室温→各管参加
21.5ml蒸馏水→测定吸光度并绘制标准曲线〔550nm波长处〕
.
•二、样品中复原糖提取
•准确称取0.65g面粉，
•放在100ml烧杯中，先
•以少量蒸馏水调成
•糊状，然后参加15ml
•蒸馏水，混匀，于50℃恒温保温20min，
时搅拌，使复原糖浸出，过滤，将滤液全部
收集在25ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，
即为复原糖提取液。
.
三.总糖提取
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