DB34T 1943-2013 猪瘟病毒强毒株与疫苗株鉴别检测套式RT-PCR方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T1943—2013

猪瘟病毒强毒株与疫苗株鉴别检测套式

RT-PCR方法

Methodofdetectionanddifferentiationofvirulentandvaccinestrainsofclassical

swinefevervirusbynestedRT-PCR

2013-08-28发布2013-09-28实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T1943—2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学、安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽安泰农业开发有限责任公司、安徽

浩翔农牧有限公司、蚌埠市八大集种猪场提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽安泰农业开发有限责任公

司、安徽浩翔农牧有限公司、蚌埠市八大集种猪场。

本标准主要起草人：孙裴、李郁、魏建忠、朱良强、殷宗俊、杨勇、何长生、高亚飞、占松鹤、曾

祥明、秦娟。

I

DB34/T1943—2013

猪瘟病毒强毒株与疫苗株鉴别检测套式RT-PCR方法

1范围

本标准规定了猪瘟病毒（Classicalswinefevervirus，CSFV）野毒株与疫苗株鉴别检测的套式

RT-PCR方法。

本标准适用于猪瘟的诊断和监测，适用于猪活体及其脏器、血液、排泄物和细胞培养物中CSFV核酸

的检测及野毒株与疫苗免疫毒株的鉴别。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T27540猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法

中华人民共和国农业部公告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

强毒株

能使猪产生临床症状和死亡的猪瘟病毒株称猪瘟病毒强毒株。

3.2

疫苗株

能够引起机体免疫应答，但不能或轻微能使猪产生临床症状的猪瘟病毒株称猪瘟病毒疫苗株。

4试剂和材料

4.1试剂

除另有说明，所有试剂均为分析纯；所有试剂均用无RNA酶的容器分装。

4.2Trizol

RNA提取试剂，包装瓶用锡箔纸包裹，于4℃~8℃保存。

氯仿：4℃预冷。

4.3异丙醇

1

DB34/T1943—2013

4℃预冷。

4.475％乙醇

用新开启的无水乙醇和DEPC水配制，-20℃预冷。

4.5DEPC水

去离子水中加入0.1％DEPC，37℃作用1h，（121±2）℃,高压灭菌15min。

4.6RNA酶抑制剂（30U/μL）。

4.710×PCRbuffer（10mmol/LpH8.3Tris-HCl，50mmol/LKCl，1.5