常用电泳技术课件.ppt

3.等电聚焦等电聚焦（IEF）是根据蛋白质分子等电点的不同，在一个连续的、稳定的线性pH梯度中电泳，从而对蛋白质进行分离和分析的技术。由于它具有聚焦效应（浓缩效应），是目前分辨率最高的技术。根据建立pH梯度不同：载体两性电解质：将载体两性电解质溶解在电泳介质溶液中制胶，形成聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳，然后将凝胶引入电场中等电聚焦。载体两性电解质在凝胶中迁移形成pH梯度，而样品则聚焦在其等电点处。分辨率为0.01pH单位，上样量不可过高。固相pH电解质：将弱酸、弱碱两性基团直接引入丙烯酰胺中，在凝胶聚合时就形成pH梯度，因此pH梯度固定。分辨率达0.001pH单位，上样量可更大。等电聚焦原理应用可测定蛋白质的等电点，对蛋白质组分进行分离、分析、纯化、定性、定量以及制备。4.双向电泳（2D）双向电泳是将样品电泳后，在它的垂直方向再进行第二次电泳。目前的双向电泳大都是第一向为等电聚焦，第二向为梯度SDS。这样经过电荷和质量的两次分离后，就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息，电泳结果不是带，而是点。这是目前电泳技术中分辨率最高，可以得到蛋白质信息最多的技术。双向电泳应用双向电泳不仅能同时测定蛋白质的等电点、分子量，更重要的是它还可用于了解蛋白质混合物的组成及变化，如不同细胞、亚细胞中的蛋白质组成及含量差异，从而在病理研究、组织培养以及生物进化等领域中的应用越来越多。小结

本章介绍了四种主要的电泳方法：区带电泳、移界电泳、等电聚焦、等速电泳，讨论了每种方法的应用实例，如SDS和等。为解释蛋白和生物大分子在电场中的移动，我们采用源于胶体化学的固体颗粒模型。此模型采用双电层、zeta电势的定义以及表面结合离子层的概念。电渗现象和粘滞力会阻碍大分子的分离。稀溶液数学模型可用来确定分离时间以及区带电泳、等电聚焦和等速电泳中的带宽。**本模板来源于网络，由第一课件网整理发布，免费分享给大家使用。第一课件网是国内最专业的PPT模板分享网站，所有模板均经严格测试，保证100%下载，100%精彩！更多精彩PPT模板，敬请访问使用时删除此备注即可。配色方案修改：配色方案在【格式】--【幻灯片设计】--【配色方案】--【编辑配色方案】下调整。LOGO的添加：Logo添加修改在【视图】--【母版】--【幻灯片母版】下调整。直接选择logo图片删除或修改。字体格式的设置：括标题和文本格式的设置在【视图】--【母版】--【幻灯片母版】下调整。*模板来自于/*模板来自于*姓名：高源专业:生物化工学号：201420709电泳技术*Contents简介及发展过程1234电泳的原理影响电泳分离的主要因素常用的电泳介绍*1.简介及发展过程电泳可以定义为带电的胶体粒子或大分子在外加直流电场中向带相反电荷的电极做定向移动的现象。带正电荷的粒子向负极移动，带负电荷的粒子向正极移动。电泳分离则是利用荷电溶质在电场中泳动速度的差别来进行分离的一种方法。电泳技术：*最早发现于1808年。俄国物理学家Pehce于1809年在湿黏土中插上带玻璃管的正负极两个电极，加压后发现正极玻璃管中原有的水层变浑浊，即带负电荷的黏土颗粒向正极移动，这就是电泳现象。在1937年由瑞典科学家A.tiselius利用U形玻管进行血清蛋白电泳，以界面折光率差别分离蛋白。1948年Wieland等发明以滤纸作为支持物，使电泳技术大为简化。电泳作为一种生化分离手段已广泛应用于生物大分子的分离、纯化、分析、制备以及用于测定它们的分子量、等电点等。已成为生命科学、医学、制药学、食品、生物工程、环境工程等领域常用的实验手段。*2.电泳的原理*带有电荷生物分子在电场作用下发生移动;由于混合物各组分所带电荷性质，数量以及分子量各不同，在同一电场作用下，各组分的泳动方向和速度也各有差异;在一定时间内，他们移动距离不同，从而可达到分离鉴定的目的。*1.蛋白质的电荷来源从电泳的角度来看，蛋白质分子最主要的特性就是它的带电行为：等电点（pI）：在某一条件的PH下，蛋白质所带的正负电荷数相等。即净电荷为零。当体系：pHpI，蛋白质分子会解离出而带负电，向阳极移动；当体系：pHpI，蛋白质分子会结合而带正电，向阴极移动；特定蛋白质的等电点取决于它的氨基酸组成，是一个物理化学常数。对于不同的蛋白质，其等电点范围很宽，在一定的