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内毒素检测方法

一、内毒素的检测方法

常用的检测内毒素的方法有以下几种：

1.凝胶法：通过鲎试剂（鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶

原、凝固蛋白原等）与内毒素发生凝集反应产生凝固蛋白（凝胶）的

原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法是通过观察有无凝胶

形成作为反应的终点。此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设

备，可以进行定性或半定量测定。

2.动态浊度法；浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的

浊度变化而测定内毒素含量的方法。内毒素与鲎试剂中的凝固酶原激

活呈凝固酶，凝固酶可使凝固蛋白原变成凝固蛋白（即产生凝胶），

使液体的浊度发生变化，通过动态观察浊度变化速率检测。

3.终点显色法:通过由于细菌内毒素激活鲎试剂（鲎试剂中含有C

因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等）C因子，引起一系列酶促

反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质（含

N-α-苯甲酰-DL-精氨酰-4-硝基苯胺盐酸盐），使其分解为多肽和黄色

的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。同时，对硝基苯胺（pNA）

也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax=545nm），避免了供试品本

身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。根据产物颜色判断内毒素浓度，

又称为比色法。

4.动态显色法:内毒素可激活鲎试剂引起一系列酶促反应，产生黄

色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm），在一定时间内，动态观察

对硝基苯胺（pNA）的生成量，与细菌内毒素浓度成正相关。但此方

法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件。

5.其他检测方法：还有一些直接测定内毒素定量的方法如酶联免

疫吸附测定法(ELISA)、免疫学方法（如火箭免疫电泳试验法、L-聚

赖氨酸法、双抗体夹心法、荧光偏振法等）等，这些方法的特点是特

异性、准确性高，但其应用尚待大量临床实践的验证，操作尚待进一

步简化；还有一些间接测定的方法，如生物学方法利用LPS刺激免

疫细胞产生IL-1、TNF，通过间接测定IL-1、TNF等细胞因子含量，

推算出待检样本中的LPS含量；化学发光法：应用CR1和CR3受体

诱导中性粒细胞的氧化反应作为一个反应平台，通过测定内毒素对中

性粒细胞的生物学作用来检测内毒素的含量；流式细胞术：应用针对

内毒素表面抗原决定簇的单克隆抗体对内毒素进行荧光标定而后应

用流式细胞仪进行检测。

国内外文献报道，正常人血中内毒素浓度为：＜0.1EU/ml。随着

内毒素检测技术的发展，不同的前处理方法、仪器及测定原理的不同，

检测结果会存在着一定差异。由于干扰鲎试验准确性干扰因素的分析

包括鲎试剂本身、操作条件、配制原料等，如试验的最适pH为6.25～

7.25才能形成最佳凝胶、温度对鲎试剂的灵敏度影响很大，温度应控

制在25～40℃之间、检测用水要求按中国药典规定稀释用的细菌内

毒素检查用水应达到在（37±1）℃的条件下与0.03EU/ml鲎试剂混匀

二十四小时内不产生凝集反应的标准、所用器皿要彻底的洗干净和灭

菌，防止外源性内毒素的混入等等条件。因此也限制了内毒素测定应

用于临床，建议当使用内毒素应用于临床诊疗过程中，临床检测内毒

素时，应尽量选择定量动态水平的检测，并结合临床症状，应用合适

的仪器和试剂盒来检测内毒素这一个检验指标评估和预测病人是否

发生败血症，实验室应该建立标准化检测方案，以更好的为临床精准

诊疗服务。

细菌内毒素检测方法，目前国内一个是凝胶法，另一个是光度法，

多数是以光度法测定，可得到一个定量的结果，这样的结果也较可靠。

内毒素很多人较陌生，甚至有些临床医生，不是感染方面的医生，可

能不一定知道，或知道部分，内毒素其实是革兰氏阴性杆菌，细胞上

的一种脂多糖，这个细菌死亡后，这些细胞壁脂多糖释放，其为一种

热原质，当此种内毒素进入血流后会造成发热。

所以有必要检查此方面，有时是感染性疾病，不知是病毒感染、

细菌感染，还是真菌感染，就需用内毒素来检查，观察是否比正常高

较多，若高较多，则可能是细菌方面感染，内毒素方面确实是阴性杆

菌，可能是革兰氏阴性菌感染，医生可能需用抗阴性杆菌的药物控制

病情。

二、内毒素是什么？

内毒素(endotoxin，ET)是构成革兰阴性细菌细胞壁外膜最外