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核酸提取及常见问题分析
主讲人：刘召华
北京天为时代科技主办
南京天为生物科技协办
24小时效劳热线：025－
内容
第一局部：DNA提取方法简介
第二局部：DNA提取常见问题、
原因分析及其对策
第三局部：RNA提取方法简介
第四局部：RNA提取及其RT-PCR常见
问题、原因分析及其对策
整理ppt
前言
前言
核酸是遗传信息的载体，是最重要的
生物信息分子，是分子生物学研究的主要
对象，因此核酸的提取是分子生物学实验
技术中最重要、最根本的操作。
整理ppt
第一局部：第一局部：DNADNA提取方法简介提取方法简介
第二局部：DNA提取常见问题、
原因分析及其对策
第三局部：RNA提取方法简介
第四局部：RNA提取及其RT-PCR常见
问题、原因分析及其对策
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DNA提取的几种方法
DNA提取的几种方法
q基因组DNA的提取
ØCTAB法
ØSDS法
Ø其它
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DNA提取的几种方法
DNA提取的几种方法
q非基因组DNA的提取
Ø质粒DNA的提取
•碱裂解法
•煮沸法
Ø线粒体、叶绿体DNA的提取
•差速离心结合SDS裂解法
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基因组DNA－CTAB法
基因组DNA－CTAB法
qCTAB法原理〔植物DNA提取经典
方法〕
ØCTAB〔hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基
溴化铵〕，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合
物。
Ø该复合物在高盐溶液中〔0.7mol/LNaCl〕是可溶的，通过有机溶剂
抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后参加乙醇沉淀即可使核酸别离
出来。
注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此在将其参加冰冷的
植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
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基因组DNA－CTAB法
基因组DNA－CTAB法
qCTAB提取缓冲液的经典配方
Tris-HClEDTA
组份NaClCTABβ-巯基乙醇
（pH8.0）（pH8.0）
0.1%（V/V）
终浓度100mM20mM1.4M2%(W/V)
使用前加入
ØTris-HCl〔pH8.0〕提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
ØED
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