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自由基检测方法自由基检测方法＊

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赵宝洪，高洪

（1.云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明650201；2.海关总署缉私局瑞丽缉毒犬基地，

云南瑞丽678600）

摘要：自由基是含有未成对电子的原子、分子或原子团，它是线粒体在电子传

递的过程中产生的，正常情况下，机体的自由基清除系统可使自由基的产生与消

除保持在极低的动态平衡水平上，对机体是有利的，但当体内蓄积过量自由基时，

它能损伤细胞，导致动物组织或细胞的氧化，损害细胞膜上的脂类和蛋白质等，

从而使细胞膜黏度增加，流动性下降，抗氧化酶丧失活性，造成膜内外离子交换

紊乱等，致使细胞内钙离子超载，黄嘌呤氧化酶活性升高，又进一步加速自由基

的产生。为提高自由基对动物机体损伤的诊断效率，近年来自由基检测方法在病

理学、生物学中发展迅速，并得到了广泛应用。

关键词：自由基；检测方法；概述

自由基(freeradicals，FRs)化学反应性极强，极不稳定，半衰期短，其化学

反应性的特点是连锁反应，一经启动即可连续发生。从生物学角度讲，通常所说

的FRs主要是指活性氧(activeoxygen)，即氧的某些代谢产物和一些反应的含氧

产物。由于FRs具有活泼的化学反应特性，因而在生物体内具有重要的生理及

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病理功能，具有重要的生物学意义。自1900年，GombergM首次证实三苯甲

基自由基以来，自由基参与生命过程中许多重要的生化反应逐步为人们所认识，

特别是随着现代检测分析技术的日新月异，自由基在生物和病理学领域的作用研

究迅速发展。而寻求简便、快速、准确、高效的自由基检测方法成为研究自由基

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生物学作用的关键。

与医学密切相关的自由基是氧自由基(oxygenfreeradical，OFR)，包括超氧

阴离子和羟自由基，大量研究结果表明自由基与许多疾病的发生有着密切的联

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系，特别是与生物膜损伤的关系更是目前研究的热点。自由基已日益受到人

们的重视，现将自由基的检测方法介绍如下。

1自由基相关酶的测定

机体内清除自由基的酶系统主要有超氧化物歧化酶(Superoxidedimutase，

SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione

Peroxidase，GSHPx)等酶类组成。在正常情况下，机体代谢过程中产生的超氧阴

离子自由基被细胞的SOD歧化为HO，后者再由细胞浆的CAT和GSHPx催

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化降解为水和氧。

＊收稿日期

作者简介：赵宝洪(1982－)，男，云南红河州人，硕士研究生，主要从事兽医分子病理学与比较病理学研究。*通讯作者

1.1超氧化物歧化酶的测定

SOD属于金属酶，分CuZnSOD、MnSOD、FeSOD3种。由于SOD的底

物超氧阴离子自由基寿命极短，目前除了应用脉冲射解技术或快速冰冻结合电

子自旋共振(electronspinresonance，ESR)波谱直接获得SOD与超氧阴离子自由

基反应的动力学信息外，一般都采用间接的活力测定法来测定SOD。下面介

绍几种重要的测定方法。

1.1.1邻苯三酚自氧化法国外多使用经典的邻苯三酚自氧化法(简称Marklund

法)，Marklund法是采用420nm处光吸收测定。酶活力定义为：在一定条件下1

mL的反应液中，每分钟控制邻苯三酚在420nm波长的自氧化速率达50%的酶

量定为1个活力单位。顾孔书等对邻笨三酚自氧化法的测定结果影响因素进行了

探讨，结果邻苯三酚自氧化法受到溶液的酸碱性、温度、存放时间及邻苯三酚