色谱分析技术在兽药残留及违禁添加物检测中的应用具体实例课件.pptVIP

色谱分析技术在兽药残留及违禁添加物检测中的应用具体实例;国内检测方法的分类：

国家标准方法、地方标准方法、

行业标准方法、企业标准方法.......

检测方法标准的基本内容：;1、样品提取

2、样品净化

3、上机测定

4、结果计算;原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法—高效液相色谱法（原文参见GB/T22388-2008）2008-10-07发布2008-10-07实施;1.2样品处理

1.2.1提取

（1）液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等

称取2g（精确至0.01g）试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以不低于4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加入5mL水混匀后做待净化液。;1.2.2净化

阳离子固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg/3mL，或性能相当者。使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。

将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。;a）色谱柱：C8柱，250mm×4.6mm（i.d.），5μm，或相当者；

C18柱，250mm×4.6mm（i.d.），5μm，或相当者。

b)流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（85+15，体积比），混匀。

C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比），混匀。

c)流速：1.0mL/min。

d)柱温：40℃。

e)波长：240nm。

f)进样量：20μL。;1.7空白实验

除不称取样品外，均按上述测定条件和步聚进行。

1.8回收率及方法定量限

在添加浓度2mg/kg~10mg/kg浓度范围内，回收率在80%~110%之间，

相对标准偏差小于10%。本方法的定量限为2mg/kg。

1.9允许差

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

;1.2样品处理

1.2.1提取

称取6g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入30mL0.1mol／LNa2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH＝4)，于液体??匀器上快速混合1min，再用振荡器振荡10min，以10000r／min离心10min，上清液倒人另一离心管中，残渣中再加入20mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液。;1.3高效液相色谱测定

液相色谱条件

a)色谱柱；MightsilRP-18GP，3μm，150mm×4.6mm或相当者；

b)流动相：乙腈+甲醇+0.01mol／L草酸溶液(2+1+7)；

c)流速：0.5mL／min；

d)柱温：25℃；

e)检测波长：350nm；

f)进样量：60μL。;1.4标准曲线的绘制

用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备液逐级稀释得到5、10、50、100、200ng/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。混合标准工作溶液当天配制。

1.5定量测定

待测样液中各药物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。;1.6平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。

1.7空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。

1.8结果计算;3.蛋中苏丹红染料的检测方法—高效液相色谱法

（原文参见GB/T19681-2005）;1.3提取

准确称取蛋黄1g～5g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入10mL～30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，50℃下用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，待净化。

1.4净化

层析用氧化铝（中性100目～200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。

氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲压实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。

;