组培实验室的设计.ppt

试管苗的生态环境1、高温且恒温2、高湿度3、弱光照4、无菌第63页,共69页，星期六，2024年，5月试管苗的特点生长细弱，茎、叶表面角质层不发达茎、叶呈绿色，但叶绿体的光合作用较差叶片气孔数目少，活性差根的吸收功能弱对逆境的适应和抵抗能力差第64页,共69页，星期六，2024年，5月试管苗的驯化驯化的目的：驯化的原则：驯化的方法：第65页,共69页，星期六，2024年，5月试管苗的移栽移栽驯化基质的选择移栽的方法：影响试管苗移栽成活的因素：第66页,共69页，星期六，2024年，5月提高试管苗移栽成活率的途径提高试管苗生根质量加强移栽前炼苗保证组培苗移栽基质质量作好移栽前根系处理湿度控制温度控制光照控制第67页,共69页，星期六，2024年，5月思考题1、培养基的类型有哪些？2、培养基的主要成分有哪些？各有何作用？3、外植体的选择有什么要求？4、无菌操作有哪些方法？5、简述植物组织培养中褐变发生的原因及其防止措施。第68页,共69页，星期六，2024年，5月*感谢大家观看第69页,共69页，星期六，2024年，5月选择合适的大小：根据不同的植物而异，太大容易污染，太小，多形成愈伤组织甚至难于成活。一般在0.5-1.0cm之间。选择最适的时期：一般按植物生长的最适时期选取材料第31页,共69页，星期六，2024年，5月外植体的类型1、茎尖（园艺植物组织培养中应用最多，繁殖率高，不易发生遗传变异，但取材有限）2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材容易）3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分化产生植株，取材容易，操作方便，但易发生变异）；4、花球和花蕾5、种子、根、块根、块茎、花瓣等。第32页,共69页，星期六，2024年，5月二、外植体的灭菌外植体的消毒是组培成功与否的第一关键步骤。外植体的预处理：对外植体进行修整,去掉不要的部分,在流水下冲洗干净.外植体的表面灭菌：原则：充分灭菌，但不伤外植体；不同的外植体，灭菌的要求也不一样第33页,共69页，星期六，2024年，5月常用灭菌药剂的使用和效果消毒剂使用浓/%清除难易消毒时/min灭菌效果次氯酸钠2易5-30很好次氯酸钙9-10易5-30很好漂白粉饱和溶液易5-30很好升汞0.1-1较难2-10最好酒精70-75易0.2-2好过氧化氢10-12最易5-15好溴水1-2易2-10很好硝酸银1较难5-30好抗菌素4-50mg/L中30-60较好第34页,共69页，星期六，2024年，5月常用的灭菌方法(1)茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗---75%酒精浸泡10-20min---无菌水洗2-3次或Naclo或升汞溶液泡10-15min---无菌水洗3-4次（2）果实和种子的消毒：自来水冲洗10-30min---70%酒精漂洗---2%Naclo液浸10min---无菌水2-3次---取出种子培养（3）根及地下部器官的消互毒：自来水冲洗---纯酒精漂洗---升汞浸5-10min或2%Naclo液浸10-15min---无菌水洗3次（4）花药的消毒：自来水冲洗70%酒精浸泡数秒钟---无菌水洗2-3次---漂白粉上清液浸10min---无菌水洗2-3次第35页,共69页，星期六，2024年，5月消毒注意事项表面消毒剂对植物组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。在表面消毒后，必须用无菌水漂洗材料3次以上以除去残留杀菌剂，但若用酒精消毒，则不必漂洗。与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。HgCl2效果最好，但对人的危害最大，用后要用水冲洗至少5次。第36页,共69页，星期六，2024年，5月三、外植体的接种和培养第37页,共69页，星期六，2024年，5月（一）外植体的接种------无菌操作是将表面灭菌的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的全部过程。整过接种过程均需无菌操作。第38页,共69页，星期六，2024年，5月外植体接种全过程

酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿第39页,共69页，星期六，2024年，5月酒精擦拭旋转灼烧取外植体接种盖好瓶塞修剪外植体第40页,共69页，星期六，2024年，5月第4